目的 应用原位杂交方法检测急性白血病（acute leukemia,AL）不同类型中髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）基因mRNA表达的差异，探讨MPO基因表达的检测在急性白血病分型诊断中的意义。方法 （1）探针的制备：应用Promega总RNA提取试剂盒，筛选MPO基因高表达的初发急性早幼粒细胞性白血病病人，从骨髓中提取总RNA，通过反转录，合成cDNA，设计特异性引物，经PCR扩增得MPO基因cDNA片段，全长约559bp；将该片段经TA载体克隆重组于质粒中，经体外扩增，提取质粒DNA，限制性酶切后，通过凝胶电泳得到特异性片段并回收纯化，将该片段作特异性探针，以地高辛标记，用于原位杂交。（2）标本获取及分组：采集60例AL病人及20例对照组骨髓或外周血进行细胞涂片及原位杂交，检测MPO基因的表达。60例AL病人（男37例女23例，年龄2～78岁，中位年龄20岁），按FAB分型分为急性粒细胞白血病组（acute myeloid leukemia,AML）与急性淋巴性白血病组（acute lymphoid leukemia,ALL）。①AML组30例：含初诊病人28例，未缓解病人2例，包括M₁型7例，M₂型6例，M₃型6例，M₄型6例，M₅型4例，M₇型1例。②ALL组30例：初诊病人9例及未缓解病人1例，完全缓解病人20例。初诊及未缓解病人骨髓或外周血中幼稚细胞比例均大于60％。对照组20例（男11例，女9例，年龄6～58岁，中位年龄18.5岁），均为非造血系统疾病患者，骨髓常规检查未见异常。（3）原位杂交结果判定：原位杂交结果阳性者表现为胞浆内出现兰紫色颗粒，阳性反应强度分为四级：Ⅰ．阴性（一）：全胞浆无兰紫色颗粒；Ⅱ．弱阳性（±）：可见少数兰紫色颗粒，散在分布，约占胞浆的1／2以内；Ⅲ．阳性（+）：胞浆内兰紫色颗粒弥漫性分布，占胞浆的1／2以上；Ⅳ．强阳性（++）：胞浆充 中义搁要 满致密的兰紫色颗粒。将每片计数200个有核细胞并计算阳性细胞百 分率，阳性细胞百分率)5％的标本为杂交阳性。将所得数据进行统 计学分析，判断MPO基因表达在各组表达情况。 结果（l）各组原位杂交结果：①阳性率：AML组 30例病人 中除1例M7外，MPO基因均为阳性表达，30例ALL病人及20例对 照均为阴性表达。②阳性细胞百分率：AML组阳性细胞百分率在4．5～ 100％之间；30例ALL病人及20例对照组阳性细胞百分率均小于5％， 其阳性细胞百分率分别在0％～又0％与0％～2．5％之间；AML组与 ALL组、对照组比较阳性细胞百分率差别有显著意义（P＜O．05）；ALL 组、对照组比较差别无显著意义（P叩刀5卜 门）M皿组各亚型杂交结 果：除1例M，型外AML病人杂交结果均呈阳性。AML－M3型病人阳 性细胞百分率最高，可达 100o，平均值为 84．7 ti 7．4O，多数细胞 呈强阳性表达；MZ、M4其次，平均阳性细胞百分率分别为55．7土4．8％ 与50．5士3．0O；Mi与MS最低，其平均值分别为32．5士7．60与16．3 士2．3％，且多数细胞为弱阳性表达。（）MPO原位杂交与细胞化学敏 感性比较：24例AML病人同时进行MPO细胞化学染色，结果示16 例阳性，8例阴性（阳性率66．7％，）；此24例病人原位杂交检测MPO mRNA结果均示阳性（阳性率 100％）；二者比较原位杂交法更敏感 （P＜O．05），阳性率高。 结论 本研究显示以地高辛标记该探针进行原位杂交，检测AL 病人w 基因mR＊表达，是一种敏感的检测方法。初诊及未缓解的 AML病人多呈阳性表达，其中M。型阳性细胞百分率最高，阳性强 度最强，M卜M。型其次，M；与M。型最低，M，型为阴性。原位杂交 检测敏感性较细胞化学高，能更好的识别粒系早期细胞；MPO mRNA 在ALL病人及正常人中呈阴性表达。因此惭 基因mRNA表达可作为 一种敏感的髓系检测标志，在急性白血病分型诊断中有重要价值。