大鼠性成熟前期睾丸扭转对性成熟期健侧睾丸c-kit、PI3K表达的影响

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目的:了解大鼠性成熟前期一侧睾丸扭转后,对处于不同状态的扭转睾丸(扭转未坏死睾丸、扭转疑似坏死睾丸、扭转坏死睾丸),特别是扭转疑似坏死睾丸、扭转坏死睾丸,采取何种手术方式(复位/切除),可最大限度降低性成熟期对侧睾丸生精功能的损害。方法:(1)实验方法:采用国际通用的Turner法制作性成熟前期的睾丸扭转模型:56只3周龄雄性SD大鼠,随机分成7组,每组8只,任选一组行假手术,作为对照组(Control group,CG)。扭转未坏死睾丸复位组(Non-necrotic testis detorsion group,NNTD):左侧睾丸逆时针扭转90°固定4h后复位睾丸;扭转未坏死睾丸切除组(Non-necrotic testis orchiectomy group,NNTO):左侧睾丸逆时针扭转90°固定4h后切除睾丸。扭转疑似坏死睾丸复位组(Suspected necrotic testis detorsion group,SNTD):左侧睾丸逆时针扭转360°固定4h后复位睾丸;扭转疑似坏死睾丸切除组(Suspected necrotic testis orchiectomy group,SNTO):左侧睾丸逆时针扭转360°固定4h后切除睾丸。扭转坏死睾丸复位组(Necrotic testis detorsion group,NTD):左侧睾丸逆时针扭转720°固定4h后复位睾丸;扭转坏死睾丸切除组(Necrotic testis orchiectomy group,NTO):左侧睾丸逆时针扭转720°固定4h后切除睾丸。术后继续饲养6周至性成熟期,采用快速脱颈椎法处死SD大鼠,切取对侧睾丸石蜡包埋做光镜下组织形态学观察,以及免疫组织化学染色法检测睾丸精原干细胞因子受体(Stem cell factor receptor,c-kit)及磷酯酰肌醇-3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)的表达。同时抽取心脏血液离心后取血清,ELISA法检测血清性激素水平(卵泡刺激素FSH、黄体生成素LH及睾酮T)。(2)统计学方法:实验数据采用Excel进行整理,数据分析采用SPSS18.0完成。计量资料用`X±S形式表示,各组间指标差异的比较采用单因素分析进行,若差异具统计学意义,则采用lsd法进一步作两两比较。以p<0.05为差异具统计学意义。结果:(1)组织形态学改变:cg组健侧睾丸曲细精管内生精上皮完好,无脱落,各级生精细胞均排列有序,无生精小管萎缩;nntd组和nnto组:健侧睾丸均未出现明显形态学改变;sntd组和snto组:轻微的形态学改变,主要表现为生精上皮细胞层数减少,少量生殖细胞脱落于管腔中;ntd组和nto组:前者睾丸生精上皮细胞层数减少明显,部分生殖细胞脱落于管腔中,生殖细胞排列紊乱,可见生精小管萎缩,后者未出现明显的形态学改变。(2)睾丸组织中生精细胞及间质细胞的c-kit、pi3k的iod值结果:nntd组和nnto组间比较,差异无统计学意义(p>0.05);sntd组和snto组比较,差异也无统计学意义(p>0.05);但ntd组和nto组比较,ntd组中c-kit、pi3k的iod值均明显低于nto(p<0.05)。与假手术对照组比较,nntd组、nnto组及nto组中c-kit、pi3k的iod值均无明显统计学差异(p>0.05);与假手术对照组比较,sntd组、snto组以及ntd组中c-kit、pi3k的iod值均显著降低(p<0.05)。(3)血清性激素水平(卵泡刺激素fsh、黄体生成素lh及睾酮t):fsh、lh在各组中升高,t水平降低,但各性激素水平(fsh、lh、t)在nntd组与nnto组间比较、以及sntd组与snto组间比较,差异均无统计学意义(p>0.05);性激素水平(lh、fsh、t)在ntd组与nto组间比较,ntd组的lh、fsh显著升高,t明显降低(p<0.05)。cg组各性激素水平(fsh、lh、t)分别与nntd组、nnto组以及nto组间比较,差异均无统计学意义(p>0.05);与cg组相比较,sntd组、snto组以及ntd组fsh、lh均升高,t均降低(p<0.05)。结论:1、大鼠性成熟前期扭转未坏死睾丸,无论复位还是切除,对性成熟期健侧睾丸均无损伤;性成熟前期扭转疑似坏死睾丸,无论复位还是切除,对性成熟期健侧睾丸均有轻微损害;2、性成熟前期扭转坏死睾丸的切除,对性成熟期健侧睾丸具有保护作用,应尽可能切除。
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