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目的:脑室下区(SVZ)是成年脑内重要的神经发生区,NMDA受体是中枢神经系统主要的兴奋性氨基酸受体。NMDA受体在SVZ区细胞的超微分布未见报道,鉴于此,本实验研究NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在成年大鼠SVZ区神经干细胞上的超微分布。
方法:取健康雄性成年SD大鼠,灌注固定,取脑,用同一固定液后固定,做50μm振动切片,梯度蔗糖浸泡,液氮冻融处理后,室温下兔血清封闭,应用包埋前免疫电镜双技术,nestin免疫酶组织化学技术显示神经干细胞,免疫金-银标记法显示NR1、NR2A、NR2B,之后取SVZ区免疫反应阳性部位的组织,经系列脱水,置换,Epon812树脂浸润,包埋,聚合,修块,做50nm超薄切片,经醋酸铀、枸橼酸铅双重染色,透射电镜观察、拍照、图像分析。
结果:
1.Nestin免疫反应阳性产物是黑色嗜锇电子致密物,呈絮状分布在成年大鼠SVZ区成神经细胞(A型细胞)、星形胶质细胞(B型细胞)、神经前体细胞(C型细胞)和室管膜上皮细胞(E型细胞)的胞浆内。
2.NR1、NR2A、NR2B免疫反应阳性产物呈黑色颗粒状,分布在成年大鼠脑SVZ区上述各型细胞以及毗邻纹状体中神经元的胞膜上和胞浆内,且在胞浆内的高尔基复合体、粗面内质网上可见金颗粒标记。
3.双标实验中,成年大鼠脑SVZ区上述四型细胞的胞浆内均可见有NR1、NR2A、NR2B免疫金颗粒与nestin免疫反应阳性产物的共表达。阴性对照未见任何标记。
结论: NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在成年大鼠脑SVZ区A型、B型、C型和室管膜上皮细胞的胞膜和胞浆内以及高尔基复合体、粗面内质网均有表达,且与nestin免疫反应阳性产物在胞浆内共存。