【摘 要】
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该研究工作主要分以下四个部分:第一部分运用基因组DNA缓移技术从大鼠PromoterFinder文库中扩增到了2.5kb的20αHSD基因5侧翼区序列,并对其进行了序列测定.第二部分将构建的
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该研究工作主要分以下四个部分:第一部分运用基因组DNA缓移技术从大鼠PromoterFinder文库中扩增到了2.5kb的20αHSD基因5侧翼区序列,并对其进行了序列测定.第二部分将构建的三个重组质粒分别与pRL-SV40质粒(内参照)共转染COS7和CHO细胞,以pGL3-Basic和pGL3-Control作对照,利用双荧光检测系统测定荧光素酶表达活性,发现其促表达活性依次为pGL3-1.6>pGL3-2.5>pGL3-338.第三部分将pGL3-1.6、pGL3-2.5和pGL3-338分别与pRL-SV40共转染的CHO细胞和COS细胞,利用无血清培养,分别加入催乳素和人绒毛膜促性腺激素(hCG),观察二种激素对20αHSD基因5侧翼调控区的表达调控作用.第四部分,为了进一步探讨了PRL抑制20αHSD基因表达的机制,将表达RRL受体长臂亚基质粒pCDNA3-PRL-R<,L>与短臂亚基质粒pCDNA3-PRL-R<,S>一起或分别与构建的pGL3-1.6重组质粒共转染CHO细胞,再给予PRL刺激,PRL是通过其短臂受体亚基抑制报告基因的表达.论文研究结果对进一步揭示对PRL和CG对20αHSD基因表达调揎伐分娩发生的机理具有一定的理论意义;对PRL、CG等激素顺式调控元件的揭示,可用于探索20αHSD基因表达相关的激活或抑制剂,进而寻找治疗早产或开发人工流产相关的药物创造条件,因而具有潜在应用价值.
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