【摘 要】
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本文对猪乙型脑炎新型协同凝集试验的建立进行了研究。研究结果如下：1.根据已发表的JEVSA14-14-2减毒株基因组序列，GenBank上发表的猪IgG1序列为模板设计两对特异性引物，通过PCR
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本文对猪乙型脑炎新型协同凝集试验的建立进行了研究。研究结果如下：1.根据已发表的JEVSA14-14-2减毒株基因组序列，GenBank上发表的猪IgG1序列为模板设计两对特异性引物，通过PCR扩增出一条长0.473bp的基因片段和一条长0.469bp的基因片段；2.为验证JEVE’基因在E.coli中表达的可行性及表达产物的抗原性，构建了原核表达载体pET-E，对表达产物进行Westernblotting分析，结果与JEV特异性猪抗血清呈现阳性反应，且无非特异性条带出现，证明表达产物抗原性较好；3.构建了原核表达载体pET-E-CH3，诱导表达，超声破碎菌体，对包涵体纯化，进行SDS-PAGE，结果在43kD处出现一条清晰的特异性蛋白条带，杂蛋白很少，纯化良好；4.确定最佳吸附浓度为1.892；血清和金黄色葡萄球菌的比例为：1∶4；最佳吸附时间确定为一个半小时，用LB培养的金黄色葡萄球菌的吸附效果最好；5.确定制作稳定液SPA和蛋白的最佳比例为1.276∶0.945。新型协同凝集试验96孔进行时血清稀释到1∶640依然可以区分阴阳性；6.为以后IgGCH3在检测其它疾病方面确立了基础，可以连接不同的病毒基因片断进行同样的试验来检测疾病。
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