[研究背景和目的]在肝癌免疫微环境中，CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-Treg细胞是一类重要的具有免疫负向调节作用的T淋巴细胞，肿瘤微环境中的肿瘤抗原和细胞因子对于Treg细胞的募集、扩增和诱导有重要的作用。然而，肿瘤微环境中为何会产生IL-2、IL-10和TGFβ1等促进肿瘤生长的细胞因子，它们受到何种机制的调控尚不明确。本研究通过分析肝癌组织中与CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-Treg细胞差异表达的相关microRNA，探讨microRNA在肝癌免疫耐受网络中的调控机制。[方法]采用microRNA芯片技术分析CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-Treg细胞高表达的肝癌组织与CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-Treg细胞低表达的肝癌组织之间miRNA表达谱的差异；通过Real-time qPCR方法进一步验证microRNA芯片结果。应用生物信息学方法预测miR-608的靶基因，通过Real-time qPCR、Western Blot实验以及构建靶基因表达载体，双荧光报告系统检测系统验证microRNA-608的靶基因。[结果]1、通过microRNA芯片技术分析CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-Treg细胞高表达的肝癌组织与CD4⁺CD25⁺CD127^dim/-Treg细胞低表达的肝癌组织之间microRNA表达谱差异，结果显示表达水平显著改变（＞2fold difference）的microRNA有20个。在Treg高表达的肝癌组织中上调的microRNA有7个： miR-1224-3p，miR-181b，miR-21，miR-221，miR-23b， miR-4259，miR-92a。在Treg高表达的肝癌组织中下调的microRNA有13个：miR-1258-p，miR-1973，miR-210-p，miR-3178-p，miR-323-5p，miR-375-p，miR-4301，miR-494，miR-608，miR-708，miR-934，miR-133a-2-p，miR-134-p。2、通过Real-time qPCR实验进一步验证miRNA芯片结果。验证结果为在Treg高表达的肝癌组织中miR-21-5p、miR-221-3p上调，miR-608下调，与芯片结果相符。3、利用生物信息学软件，我们预测TGFβ1及FoxP3为miR－608的靶基因。4、利用Western Blot实验，检测在HepG2、SMMC7721、293T细胞中转染miR-608mimic或miR-608inhibitor后培养72h时TGFβ1蛋白水平的变化。结果发现转染了miR-608mimic，这三种细胞系的TGFβ1蛋白水平均有明显下调趋势。而转染了miR-608inhibitor，293T细胞的TGFβ1蛋白水平有明显上调趋势，HepG2、SMMC7721细胞的TGFβ1蛋白水平无明显变化。5、利用Real-time qPCR实验，检测在HepG2、SMMC7721、293T细胞中转染miR-608mimic或miR-608inhibitor后培养48h时TGFβ1mRNA水平的变化。结果发现转染了miR-608mimic或miR-608inhibitor，这三种细胞系的TGFβ1mRNA水平均无明显变化（P＞0.05）。6、构建了含靶基因TGFβ1及FoxP3的3’UTR区的表达载体，通过双荧光报告基因检测，证实了miR-608与靶基因3’UTR区的相互作用。推测TGFβ1可能是miR-608的靶基因。[结论]肝癌免疫微环境免疫抑制与Treg相关，miR-608可以负调控TGFβ1基因，可作为肿瘤抑制因子发挥功能。它的异常表达也间接的调控了Treg细胞的表达。