PEG化可降解PEI-Et的构建、筛选及Smad3基因输送研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:walkman73
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动脉粥样硬化有关的疾病是导致死亡最主要的原因,其血管存在不同程度的损伤。研究发现血管损伤后,血管平滑肌细胞由静止的、分化状态转变为增殖状态。血管平滑肌细胞增殖的分子机制还不清楚,其中之一与Smad3基因有关。血管损伤后转化生长因子(TGF-β)的表达水平上调,TGF-β通过Smad3信号通路促进血管平滑肌细胞增殖。  将Smad3基因安全有效的转入血管平滑肌细胞,基因载体是关键。在各类基因载体中,聚阳离子非病毒载体具有安全、基因担载大、化学结构可控、易于化学修饰等优点。本实验将PEI800Da作为基本结构单元,以亚乙基二氯甲酸酯作为交联剂合成阳离子聚合物-PEI-Et,并对其进行聚乙二醇(PEG)修饰,以屏蔽PEI-Et表面过量的正电荷,使其在保有较高转染活性的基础上,降低载体的细胞毒性。  本论文第一部分研究内容是将PEI-Et与PEG以不同的摩尔比例(1:1、2:1、1:2)合成三种不同的P EG-Et阳离子聚合物,并研究其与基因缩合形成的复合物的特征、细胞毒性、转染效率,以筛选出最佳基因输送载体即PEG-Et1:1。第二部分研究内容是将 PEG-Et1:1作为载体运载shSmad3、Smad3基因进入兔主动脉平滑肌细胞,运用PCR、Western blot检测细胞内Smad3基因的表达,CCK8实验检测细胞的增殖。  本论文中,我们成功合成PEG-Et1:1,证明其具有缩合基因的能力、细胞毒性低、转染效率高。抑制血管平滑肌细胞内Smad3基因的表达,可抑制血管平滑肌细胞的增殖。为进一步研究体内输送Smad3基因奠定了一定的基础。
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