【摘 要】
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目的首先探讨NLRP3炎症复合体在高糖环境下培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达情况,并通过转染针对NLRP3的特异性真核表达质粒,进一步研究NLRP3炎症复合体与细胞
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目的首先探讨NLRP3炎症复合体在高糖环境下培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)中的表达情况,并通过转染针对NLRP3的特异性真核表达质粒,进一步研究NLRP3炎症复合体与细胞凋亡之间的关系。方法将体外环境培养的NRK-52E细胞分为5组:(1)正常对照组:培养基含5.6mmol/L D-葡萄糖;(2)等高对照组:培养基含5.6mmol/L D-葡萄糖,24.4mmol/L甘露醇;(3)高糖组:培养基含30mmol/L D-葡萄糖;(4)高糖+阴性对照组:细胞在转染含无关序列的重组质粒后培养于高糖培养基中;(5)高糖+干扰组:细胞转染针对NLRP3的SiRNA表达质粒后培养于高糖培养基中。各组分别培养48h后应用Western blotting检测NLRP3、ASC及Caspase-1和Caspase-3蛋白质的表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果高糖刺激可上调NRK-52E细胞NLRP3炎症复合体的表达(P<0.05)及Caspase-3蛋白质的表达(P<0.05),细胞凋亡率上升(P<0.05);而通过特异性的SiRNA抑制NLRP3蛋白质的表达后,细胞NLRP3炎症复合体表达减少(P<0.05),Caspase-3蛋白质表达减少(P<0.05),细胞凋亡率也明显下降(P<0.05)。结论高糖促进NRK-52E细胞NLRP3炎症复合体的表达,针对NLRP3的SiRNA通过减少NLRP3炎症复合体的表达从而抑制高糖诱导的细胞凋亡。
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