本研究的目的是构建马铃薯S病毒(PVS)外壳蛋白(CP)基因的原核表达载体，实现其高效表达，用表达产物作抗原制备抗血清，进一步获得纯化的抗体(IgG)与酶标记抗体并用于PVS的DAS-ELISA检测，为组装PVS的ELISA检测试剂盒奠定基础。 以质粒pGEM-pvs为模板，经PCR扩增获到了长约890bp的PVS～CP基因条带。用Ultrafree-DA试剂盒一步离心法回收特异性DNA片段并与T表达载体pBAD/Thio-TOPO连接，连接物转化受体菌TOPO10获得了Amp抗性菌落。经质粒电泳检测、PstⅠ与SphⅠ的单酶切和双酶切鉴定，筛选到了PVS-CP基因正向插入载体的阳性克隆，相应的重组质粒命名为pBAD-SCP。DNA测序结果表明882bp的不含终止密码的PVS-CP基因序列插入载体的方向正确、密码子的阅读正确，即成功构建了PVS-CP基因的原核表达载体。 用阿拉伯糖诱导工程菌TOPO10(pBAD-SCP)中外源基因的表达，获得了预期的49kDa融合蛋白。诱导研究表明在SOB培养基中融合蛋白的表达量高于LB培养基，经优化的表达条件为：37℃，在SOB培养基中用0.2％阿拉伯糖诱导4h。光密度扫描结果表明该融合蛋白在细菌总蛋白中占的比例为27％。 用溶菌酶裂解菌体，提取细菌总蛋白，SDS-PAGE显示表达的融合蛋白主要以包涵体的形式存在。用8M尿素溶解包涵体，经镍离子亲和层析纯化，获得了高纯度的目的蛋白。对纯化后的变性蛋白进行了透析复性与柱上复性处理，获得了两种复性蛋白。 分别用纯化得到的变性蛋白、透析复性获得的蛋白与柱上复性获得的蛋白作抗原免疫家兔，制备出了抗血清。琼脂糖双向扩散显示三种抗血清与抗原(融合蛋白)均能形成明显的沉淀线，即获得了该蛋白的特异性抗血清，用变性蛋白制备的抗血清的效价为1：16，其余两种为1：32。间接ElISA测定表明复性蛋白抗血清的效价分别为1：12800和1：6400，而变性蛋白抗血清的效价为1：1600。两种测定方法的结果都表明复性蛋白抗血清的效价高于变性蛋白的抗血清。 先用饱和(NH<,4>)<,2>SO<,4>进行盐析，然后用Protein G亲和层析柱纯化，获得了高纯度抗体(IgG)。用戊二醛一步法对纯化的抗体进行标记，获得了IgG的碱性磷酸酶标记物。用纯化的IgG与酶标抗体(IgG-AP)对感染PVS的幼苗进行DAS-ELISA检测，结果呈阳性，健康的幼苗则呈阴性，结果表明获得了PVS的特异性多克隆抗体与酶标记抗体。 本研究为通过基因工程途径大量制备PVS抗体、酶标抗体及组装DAS-ELISA试剂盒奠定了基础。