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目的:探究尿酸对小鼠骨髓巨噬细胞的诱导分化作用。
方法:制备死亡肿瘤细胞裂解液,采用高效液相色谱-质谱法测定该裂解液中异常增高的成分。应用不同浓度的尿酸诱导小鼠骨髓细胞,不同的时间点检测,记录其生长曲线,计算细胞的增殖率。采用最适浓度的尿酸诱导小鼠骨髓细胞,并在最佳时间点观察,应用透射电子显微镜分析尿酸诱导后小鼠骨髓细胞的超微形态。将获得的目的细胞进行免疫荧光染色,检测细胞CD14及CD68的表达水平,应用共聚焦显微镜与对照组对比分析。采用NO探针,应用共聚焦显微镜技术检测尿酸诱导后目的细胞的NO产生水平。应用流式细胞术检测尿酸诱导后骨髓细胞CD14及CD68的表达状况。
结果:应用高效液相色谱-质谱联测法检测裂解液,结果实验组中尿酸的含量明显高于阴性对照组及空白对照组。应用MTT法检测不同浓度的尿酸诱导的小鼠骨髓细胞的生长状况,发现在尿酸浓度为6mg/dl、培养6天时,骨髓细胞的生长状态最好,其吸光值最高。应用6mg/dl尿酸,诱导小鼠骨髓细胞第6天时,培养板中出现大量的等大正圆、折光性较强、细胞内颗粒较多的巨型细胞,透射电镜发现其表面有许多的伪足、皱褶、囊泡,胞浆内有大量大小不一、形态不规则的吞噬体。将此种细胞进行免疫荧光染色并用共聚焦显微镜分析后发现,该细胞高表达CD14、CD68抗原,并产生了大量的NO。应用流式细胞术检测尿酸诱导的骨髓细胞发现,CD14的表达率为90.9±7.48%,CD68的表达率为82.37±14.16%,与对照组的差异有统计学意义。
结论:尿酸与小鼠骨髓细胞共培养能够产生大量纯度较高的巨噬细胞,这是一种高效的巨噬细胞培养方法。尿酸能够促进小鼠骨髓中巨噬细胞前体细胞增殖,并最终向巨噬细胞转化。尿酸是死亡细胞裂解液的有效成分之一,尿酸可以促进小鼠骨髓巨噬细胞的分化。