茶籽饼中茶皂素的提取纯化研究

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我国茶籽资源十分丰富,对茶皂素进行开发、应用前景广阔,经济效益明显。本文在综述了茶籽饼中茶皂素(Tea Saponin)的性质及在各领域的应用和茶籽饼中茶皂素的检测、提取和纯化的基础上,以纯化的茶皂素为标准品,采用紫外分光光度法和反相高效液相色谱法(HPLC)对茶籽饼中茶皂素进行检测,优化从茶籽饼中依次提取茶油和茶皂素的工艺条件,采用除色素和大孔吸附树脂法对粗茶皂素进行纯化。本论文的研究工作由以下几个部分组成:(1)茶皂素的定量分析研究了用索氏提取器提取茶籽饼中茶皂素,反相高效液相色谱法(HPLC)测定茶皂素含量的方法;以RP-ODS(150mm×4.6mm,i.d.,5μm)作分析柱,以甲醇作流动相,流速控制在0.50 ml/min,检测波长280nm,以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,得到工作曲线为Y=3.54×106X+1.15×105,相关系数达0.9997。方法标准回收率97.93%~102.78%,相对标准偏差为0.10%~0.49%之间。通过反相高效液相色谱法测定茶籽饼中茶皂素的含量为12.706%。该法快速简捷,精密度高,重现性好,适于茶籽饼中茶皂素的检测。(2)茶油和茶皂素的提取用索氏提取法对茶籽饼中茶油和粗茶皂素的提取进行了研究,选择石油醚(沸程60-90℃)和甲醇分别作为茶油和茶皂素的最佳提取剂,通过一系列单因素实验和L9(33)正交实验,得出提取茶油的最佳工艺条件是:时间120min,料液比6mL/g,回流速度4min/次,提取率为7.8%;提取粗茶皂素的最佳工艺条件为:时间120min,料液比6mL/g,回流速度12min/次,提取率为18.77%。该法提取与分离工艺简单,提取率高,适应于工业化生产。(3)茶皂素的纯化研究比较几种脱色剂对茶皂素脱色效果的影响,结果表明双氧水用于茶皂素的脱色效果较好,通过正交实验得出其最佳脱色条件为:脱色温度60℃、脱色时间90min、H2O2加入量为3%,溶液pH值为10。以经过处理了的茶籽饼甲醇提取物为原料,考察了AB-8、S-8、X-5、D-4020、NAK-9大孔吸附树脂对茶皂素的吸附效果和解吸情况,确定了AB-8树脂对茶皂素的吸附和洗脱效果较理想。结果表明:pH=5、流速1BV/h,以90%的甲醇作洗脱剂,树脂使用4次后可再生使用。利用AB-8大孔吸附树脂分离、丙酮沉淀、甲醇结晶的方法可将茶籽饼甲醇提取物中的茶皂素提纯到96%以上,得率大于60%。
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