目的：探讨以AAV为载体，SDF-1α修饰NCSCs移植脊髓损伤部位，通过SDF-1α对于细胞的趋化和增值作用，诱导自体及移植干细胞向损伤部位迁徙、分化、增值，提高轴突及髓鞘再生、重建神经环路、促进脊髓功能的恢复。 方法：骨髓基质细胞取自股骨骨干，梯度离心提纯培养，TRIzol抽提细胞裂解液总mRNA，RT-PCR扩增SDF-1α片段插入pcDNA3.1-V5-HIS构建pcDNA3.1-SDF-1α-V5-HIS。测序排除PCR突变后，亚克隆SDF-1α到pAAV构建pAAV-SDF-1α-V5，Sca I酶切验证。原病毒质粒与辅助质粒共转染HEK 293细胞，培养72小时裂解后氯化铯梯度超速离心，取折射率1.365至1.380的病毒悬液，HN缓冲液透析，实时定量PCR检测病毒效价，Western blot验证病毒载体生物活性。 取孕14.5天胎鼠海马细胞，胰蛋白酶消化吹打成单细胞悬液，以10<4>/ml密度接种在无血清DMEM/F12培养液，每3天换半液，Nestin染色验证后，更换全培养液培养，MAP2、GFAP及GC验证其向神经元、星形细胞及少突胶质细胞的多向分化能力。取孕14.5-E17胎鼠坐骨神经，胰蛋白酶及胶原酶消化，FACS分离提取p75<+>PO<->细胞在多聚赖氨酸和纤连蛋白处理的培养瓶培养，每3天换半液。更换全培养液培养，S100、SMA及Peripheri n验证其向雪旺氏细胞、肌纤维母细胞、神经元等的多向分化能力。Boyden趋化小室验证SDF-1α对神经干细胞(NSC)的趋化作用，MTT法验证SDF-1α对神经干细胞(NSC)的增殖作用 24只脊髓重力损伤大鼠模型平均分为4组，即伪手术组(Sham)、生理盐水组(NS)、神经嵴干细胞组(NCSC)及NCSC-SDF-1α组，损伤处微量注射5 μ 1治疗液，细胞组每支注射10<5>个细胞。BBB评分及斜板实验观测实验大鼠脊髓功能恢复情况，BDA顺行示踪观测轴突再生。4周后处死动物，取损伤节段脊髓行免疫组化、免疫荧光及电镜检查。 结果： ScaI消化pAAV—SDF一1α后出现三条段带，Western印迹显示AAV—SDF一1α感染裂解液仅出现12KD条带，与理论之相符。 孕14.5天胎鼠海马组织培养获得的细胞培养后形成的细胞球为Nestin阳性，能够耐受多次体外传代。贴壁培养可以分化神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞。孕14.5-17天胎鼠坐骨神经p75+PO一细胞培养后形成似小纤维母细胞的类似细胞，多角形，细胞核较大，边缘反光强，含1到3个突起，可分化为雪旺氏细胞，肌纤维母细胞及神经元，雪旺氏细胞比例随胎鼠日龄增大而增高。 Boyden chamber趋化小室显示随SDF一1α浓度增高，迁徙到下层小室的细胞数增高(P<0.01)。MTT实验示随SDF—lα浓度增高，培养液中细胞数增加(P<0.01)。迁徙实验显示SDF一1α组神经球平均迁徙带为11.32条，大于对照组7.36条(P<0.01)；总迁徙距离为3.65mm，大于对照组213mm(P<0.01)。BBB评分及斜板实验中均显示除伪手术组外，NCSC—SDF一1α组得分最高，NS组最低，差异具有显著性。组织学检查显示移植细胞存活,SDF一1α 表达，除伪手术组外，脊髓可见不同程度的坏死，NCSC和NCSC—SDF—lα组脊髓坏死范围较对照组小。NCSC—SDF一1α组轴突脱髓鞘改变明显较NS减轻。BDA示踪显业NCSC—SDF一1α组较多示踪剂通过损伤部位，NS组少见。 结论：孕14.5胎鼠坐骨神经p75<+>P0<->细胞具有多向分化潜能，可分化为雪旺氏缉胞，肌纤维母细胞及神经元。AAV介导SDF一1α修饰NCSC移植脊髓损伤部位，可促进干细胞向损伤部位迁徙、分化，提高轴突及髓鞘再生，促进脊髓功能的恢复。