海洋枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株728胞外抑菌蛋白的分离纯化及其性质研究

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本文是在我们筛选得到对番茄灰霉病菌有较强抑制作用的海洋枯草芽孢杆菌菌株728这一前期工作的基础上,研究枯草芽孢杆菌728抗菌活性物质的性质,并分离纯化其抗菌物质,为海洋枯草芽孢杆菌菌株728及其活性物质在生物防治应用和开发新型生物农药提供科学依据。  本文的主要结论是:  1.海洋枯草芽孢杆菌菌株728的胞外抑菌活性成分是一种水溶性的蛋白质,其分子量约为53.0 kDa。  2.通过对该抑菌蛋白的性质研究,得出其为酸性蛋白质,等电点约为5.74;在60℃温度以内和pH值4~8条件下,其抑菌活性比较稳定;蛋白酶处理能够显著影响抑菌蛋白的活性,其中对蛋白酶E和胰蛋白酶最为敏感。  3.经过硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose F.F.离子交换层析和Phenyl Sepharose6F.F.疏水层析等分离纯化步骤,得到了纯度达98%的抑菌蛋白,回收率为10.4%,对番茄灰霉病菌的IC50为237.8μg/ml。  4.通过初步的质谱鉴定,海洋枯草芽孢杆菌菌株728的胞外抑菌蛋白与一种来自蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)菌株E33L的金属内肽酶(metalloendopeptidase)——bacillolysin有较好的匹配关系。  5.菌株728抑菌蛋白能够使番茄灰霉病菌H+-ATPase活性显著下降,从而抑制病菌的生长。
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