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目的:了解钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)在宫颈癌HeLa细胞中的表达以及其对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。
方法:在培养人宫颈癌HeLa细胞中加入含有不同浓度IKCal阻断剂(克霉唑,CLT)(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,)的RPMI-1640完全培养液,分别培养24h、48h、72h,用MTT法检测HeLa细胞增殖的情况,应用细胞计数的方法测定细胞生长曲线;并在倒置相差显微镜、透射电镜下观察20μmol/L克霉唑的RPMI-1640完全培养液培养48h后HeLa细胞的凋亡情况;流式细胞技术检测不同浓度克霉唑培养48h后细胞周期和细胞凋亡率的变化;半定量RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)技术检测不同浓度克霉唑作用24h、48h、72h后,HeLa细胞中IKCal mRNA表达水平的变化。
结果:(1)克霉唑以浓度和时间依赖的方式抑制HeLa细胞增殖,40μmol/L克霉唑作用72h时抑制作用最显著,细胞生长抑制率高达89.83%;(2)20μmol/L克霉唑作用48h时,倒置相差显微镜下可见细胞体积缩小,多数细胞形态由多角形变成卵圆形或圆形;电镜下可见细胞内胞核固缩,核染色质增多、积聚成团块状分布于核膜内侧、线粒体嵴消失、形成空泡等凋亡的形态学变化。(3)流式细胞术检测显示,随克霉唑浓度由O增加到40μmol/L,HeLa细胞凋亡率逐渐增加,克霉唑作用48h时细胞凋亡率由(1.55±0.04)%增加到(64.78±5.34)%;HeLa细胞周期分布与对照组相比,G0/G1期细胞由(55.85±3.02)%增加到(96.46±6.52)%,S期细胞比例由(34.82±5.55)%下降到(3.49±0.20)%,G2/M期细胞比例由(9.33±0.78)%下降到(0.05±0.01)%。(4)RT-PCR结果显示克霉唑下调HeLa细胞IKCa1 mRNA表达水平,IKCa1m RNA的相对表达量随克霉唑浓度的升高而呈下降趋势。
结论:IKCa1具有调控HeLa细胞的增殖和分化的作用,参与细胞凋亡途径的调控;克霉唑作为选择性IKCa1阻断剂,呈浓度依赖性诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡和抑制细胞增殖,它能阻滞细胞周期于G1期,并有下调细胞IKCa1 mRNA表达水平的作用,从而抑制人宫颈癌HeLa细胞而发挥其抗肿瘤作用。