人胸腺素α1基因及乳铁蛋白基因在番茄中表达的研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 2次 | 上传用户:sibsiufeuhfhkshu
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本研究首先根据植物偏爱密码子优化了人Tα1基因的核苷酸序列,然后人工合成了Tα1基因。由于Tα1基因非常小,为了增加其在植物中的表达量,我们尝试将它首尾相连形成四联体Tα1④,每个单体之间由肠激酶识别位点编码序列隔开,表达出的四联体小肽通过口服进入肠道后会被肠激酶分解成单体小肽而发挥作用。Tα1基因、Tb1④基因及经过密码子优化的lf基因被克隆到双元载体pBI121中,构建了植物表达载体pBI121Tα1、pBI121Tα1④、pBI121LF。同时我们还根据已报道的番茄果实成熟过程中受乙烯调控的果实特异性表达的E8基因启动子序列设计了引物,克隆了番茄中蔬5号的E8启动子,并构建了由E8启动子驱动lf基因表达的载体pBIE8LF,以及分别由CaMV35S启动子驱动Tα1基因和lf基因基因表达的双价植物表达载体pBITL。构建好的植物表达载体利用冻融法转入农杆菌菌株LBA4404中,并侵染了番茄子叶外植体,经过卡那霉素筛选,最终得到了再生植株67株。   转基因番茄中表达的Tα1、Tα1④和LF分别经过淋巴细胞增殖实验和抑菌实验,已经初步检测到了生物活性,为开发增加人体免疫力的保健食品苗打下了良好的墓础,具有一定的理论意义和实践意义。   
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