p66<'shc>基因转录下调剂筛选模型的建立及应用

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本文先将p66shc基因的启动子序列克隆到含有荧光素酶报告基因和新霉素抗性基因的pGL3B-neo载体中,然后将重组质粒pGL3B-neo-p66she转染入人的肺癌细胞株A549中,通过单集落分离法最终得到含有重组质粒的稳定细胞系A549/p66shc。通过一系列的条件优化,成功建立了一个以p66shc基因启动子为靶标的体外药物筛选系统p66shc/Luc。利用该系统筛选了数百种中药提取物及单体化合物,发现了抑制率达到50﹪以上的8种单体化合物和2种提取物。最终确定槲皮素能明显下调p66shc基因启动子的转录活性,当该化合物的终浓度为400mg/L时,抑制率可达到(76.871+4.922)﹪。
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