MG132抑制人晶状体上皮细胞增殖、移行和分化的实验研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:hy009009
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目的:通过体外细胞培养研究蛋白酶体抑制剂MG132对HLEC增殖、移行和分化的抑制作用,初步探索MG132防治后发性白内障的机制。方法:1、采用组织块培养法,对人晶状体前囊膜进行培养,并利用形态学观察和体外培养HLEC特异性的“晶状体小体”进行细胞鉴定。2、MTT比色法:传代的HLEC分别加入FGF-2(10ng/ml); MG132(10nM); MG132 +FGF-2(FGF-2, 10ng/ml; MG132, 10μM)并作对照,培养24h后以MTT法测定吸光度(OD)值,计算其增生率。3、移行能力测定:传代的HLEC分别加入FGF-2(10ng/ml); MG132(10μM); MG132 +FGF-2(FGF-2, 10ng/ml; MG132, 10μM)并作对照,用无菌棉棒在细胞层中划出细胞裸露区,培养24h后对行至裸露区的细胞计数,计算移行能力。4、细胞免疫组化法:收集传代的HLEC分别加入TGF-β2(10ng/ml); MG132(10μM); MG132+TGF-β2(TGF-β2, 10ng/ml; MG132,10μM)并作对照,培养24h后免疫组化检测胞浆中FN的表达。结果:1、HLEC原代培养中,细胞接种后24h内,即有部分上皮细胞自囊膜片生长移出,贴壁生长。长期培养的HLEC中,可观察到细胞呈同心圆环绕的小球体状结构,即体外培养LEC特征性的“晶状体小体”。2、10ng/ml FGF-2能诱导HLEC增殖24.2%;10μM的MG132能够有效抑制HLEC增殖,增殖率为-25.4%且能够有效抑制FGF-2诱导的HLEC增殖,增殖率为-20.1%。MG132+FGF-2组和FGF-2组对HLEC的作用有显著性差异(P<0.05)。3、10ng/ml FGF-2能诱导HLEC移行,移行能力为33.6%,10μM的MG132能够强有效地抑制FGF-2诱导HLEC的移行作用。MG132+FGF-2组和FGF-2组对HLEC的作用有显著性差异(P<0.05)。4、TGF-β2组可见HLEC胞浆中多量黄褐色沉积物;而MG132+TGF-β2组FN的表达明显下降,与对照组相比无明显差异;MG132组接近对照组。结论:1.本实验成功地进行了HLEC的体外培养,获得了高纯度的HLEC细胞,可以作为后发障的细胞学研究的实验对象。2.无论FGF-2、TGF-β2存在与否,MG132能强有效抑制HLEC增殖、移行和分化。
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