柑橘果实在贮藏、运输、销售过程中,极易发生采后病害,而这些病害的发生往往会造成严重的经济损失。由指状青霉(Penicillium digitatum)引起的绿霉病是众多采后病害中最为严重的一种病害。受侵染的果实其发病部位周围pH值会下降,随着病果发病部位的pH降低,果实病斑扩张速率更快。本课题希望找出影响指状青霉调控环境pH值的相关基因,可以为研发新的防治方法提供思路和理论依据。该研究主要内容是先通过活体实验确认指状青霉能否使果实pH值降低,再通过实时荧光定量实验判断是哪个基因影响指状青霉调控环境pH值。在确定目的基因之后,首先构建重组质粒,再根据同源重组原理对目的基因进行基因敲除,获得指状青霉突变体,对所获得的突变体进行分子鉴定和表型鉴定。本课题主要研究结果如下:1.发现指状青霉病原菌能使培养基和活体果实的pH值都下降。2.通过活体实验发现指状青霉在不同pH值的环境中其致病力有差异,尤其是在碱性的环境中,指状青霉的致病力明显弱于在中性和酸性的环境中。3.通过实时荧光定量,初步判断palF基因可能与指状青霉调控周围环境的pH有关。4.对指状青霉palF基因的氨基酸序列进行保守结构域分析,发现指状青霉palF蛋白中存在Arrestin-C和Arrestin-N保守结构域,推测palF基因参与环境pH感应信号转导途径中信号的传递。环境pH值对柑橘指状青霉致病力的影响的研究,不仅为柑橘指状青霉的分子生物学研究奠定基础,同时也为青霉属其他种病菌的研究提供理论依据。