恩诺沙星在异育银鲫体内的药代动力学及免疫调节作用

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异育银鲫(Carassiusauratusgibelio)是我国目前较有代表性的养殖品种。随着养殖集约化程度的提高,由嗜水气单胞茵(Aeromonashydrophila)、温和气单胞菌(Aeromonassobria)等病原微生物引起的细菌病成为鲫鱼养殖业发展过程中的重要问题。利用抗菌药防治细菌病,是现阶段我国水产养殖业病害防控领域的重要手段。  恩诺沙星(Enrofloxacin,EF)作为新一代喹诺酮类动物专用抗菌药,具有抗菌谱广、抗菌力强、作用迅速、体内分布广泛、与其它抗生素之间无交叉耐药性及毒性较低等特点,对水产动物常见致病菌,如嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鳗弧菌(Vibrioanguillarum)和杀鲑气单胞菌(Aeromonassalmonicida)等,具有良好的防治效果。在我国,恩诺沙星被允许应用于水产养殖,并已成为人们应对水产动物细菌性病害的重要武器。  目前关于恩诺沙星在水产动物体内的药代动力学、残留消除规律相关研究仍然不够充分,尤其是对其潜在的免疫调节功能研究更是少有涉及,因此,本研究以目前我国养殖范围较广的异育银鲫为对象,系统研究静脉注射和口灌两种给药方式下,恩诺沙星在鱼体内的药代动力学以及药物在主要组织中的蓄积和消除情况,同时探讨药物对鱼类细胞因子分泌、抗氧化系统以及白细胞吞噬活力、溶菌酶活力等免疫指标的影响。试验结果如下:  1恩诺沙星在异育银鲫体内的药代动力学  在24-26℃水温条件下,以10mg/kg剂量,研究静脉注射和口灌给药后恩诺沙星在健康异育银鲫组织内的代谢分布规律,组织中药物浓度用高效液相色谱法检测。结果表明,静脉注射后,药物在组织中经时过程符合一级吸收二室模型;口灌给药后,药物吸收良好,生物利用度F为86%,组织药物浓度-时间曲线呈现双峰,推测是由于药物在异育银鲫体内的肠肝循环作用所致。静脉注射和口灌两种给药方式下,恩诺沙星在异育银鲫体内均具有良好的组织分布,肾脏、肌肉、肝脏、鳃和血液五种组织中的AUC分别为624.2、965.9、721.8、298.0、239.6μg·h/mL和465.3、343.1、542.9、411.4、205.9μg·h/mL,最大药物浓度Cmax分别为33.48、16.91、26.44、18.71、15.30μg/mL和9.20、5.39、7.78、6.88、4.50μg/mL;药物在各组织中消除时间较长,消除半衰期T1/2β分别为169.0、141.41、113.4、36.7、63.5h和27.3、49.0、77.0、38.5、62.7h。  2恩诺沙星对脂多糖诱导的异育银鲫免疫应激的影响  本试验通过监测异育银鲫体内白介素-1β(IL-1β)、白介素-2(IL-2)、肿瘤致死因子-α(TNF-α)等细胞因子的分泌情况,探讨了恩诺沙星(enrofloxacin,EF)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的鱼类免疫应激反应的调控作用。试验选用体重约90-110g健康鲫鱼,分成3组,分别口灌生理盐水或恩诺沙星(口灌量0.4ml,EF剂量10mg/kg),1.5小时后分别腹腔注射生理盐水或LPS(注射量0.3ml,剂量6mg/kg),注射后的第3、6、12、24h采集血浆样本,分别利用酶联免疫吸附法和放射免疫法检测细胞因子、皮质醇含量。结果显示:LPS诱导后,鱼体内IL-1β、IL-2、TNF-α和皮质醇(cortisol)含量显著增加;EF能显著抑制LPS诱导的IL-1β、TNF-α的分泌(P<0.05),对IL-2的分泌则有一定促进作用,但无统计学差异(P>0.05)。数据表明,异育银鲫对LPS较为敏感,EF对LPS诱导的鱼类免疫应激反应具有一定的调控作用。  3恩诺沙星对异育银鲫抗氧化指标的影响  试验分为对照组、低剂量组和高剂量组,连续7d,每天一次口灌给药,给药剂量分别为0、10、20mg/kg,试验的第7、8、10、12、14d分别采集血液及肝胰脏样品,测定超氧化物歧化酶(SuperoxideDismatase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathioneperoxidase,GPx)等抗氧化酶活性,以及丙二醛(Malonaldehyde,MDA)浓度。结果显示,恩诺沙星对异育银鲫肝胰脏和血浆中SOD、CAT活性,以及血浆中GPx活性和MDA浓度有显著的诱导作用,并呈现剂量依赖性;而对肝胰脏中的GPx活性影响则不显著。  4恩诺沙星对异育银鲫非特异性免疫功能的影响  试验分为对照组、低剂量组和高剂量组,连续7d,每天一次口灌给药,给药剂量分别为0、10、20mg/kg,试验的第7、8、10、12、14d采集头肾、脾脏和血液样品,分别进行血细胞计数、白细胞吞噬活力测定、免疫器官指数计算和血浆溶菌酶(lysozyme,LSZ)测定。结果表明,恩诺沙星显著提升异育银鲫体内外周血红细胞和白细胞数、白细胞吞噬百分比和血浆溶菌酶活性,而对免疫器官指数及白细胞吞噬系数没有显著影响。
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