【摘 要】
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根据Zadori等发表的鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)B株基因组苷酸序列设计并合成了一对引物(P1和P2),对鹅细小病毒长春强毒株(GPV CC株)主要结构蛋白VP2和VP3基因进行扩增
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根据Zadori等发表的鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)B株基因组苷酸序列设计并合成了一对引物(P1和P2),对鹅细小病毒长春强毒株(GPV CC株)主要结构蛋白VP2和VP3基因进行扩增.所获得的PCR产物与期片段大小相符,约1.8kb.将该片段直接克隆进真核表达T载体pCR3.1中,在对年提质粒进行快速鉴定、PCR扩增以及BamaHI单酶切初步鉴定的基础上,经限制性内切酶ScaI和EcoRV分别酶切进行正反缶鉴定,证实构建了含有GPV主要结构蛋白基因的真核表达载体,即3个正向插入的克隆(pVPA1-3),同时获得2个反向插入的克隆(pVPB1-2).并对pVPA1插入片段进行了序列测定.将真核表达载体pVPA1-3用BamHI和XhoI双酶切后,定向克隆到原核表达载体pET-28b(+).对所获得的重组质粒分别经ScaI、EcoRV、BamHI/XhoI酶切,证实含有目的基因且基因插入方向正确,成功地构建了含有鹅细小病毒主要结构蛋白基因的原核表达载体(PG),为高效原核表达以及研制更为有效的基因工程疫苗打下的基础 .
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