人参皂苷是中药人参的主要活性成分,研究皂苷的生物活性对于人参的开发利用具有重要意义。人参皂苷根据其结构分为二醇型人参皂苷和三醇型人参皂苷。通过对人参皂苷的化学、生物合成以及生物活性的研究发现:人参皂苷具有免疫调节、抗炎、抗过敏、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病和抗肿瘤等作用。GLXXV是二醇型皂苷的一种,有关其生物活性的研究较少。本论文主要研究了GLXXV的抑制炎症反应活性及其作用机制。巨噬细胞作为免疫系统的重要组成部分,在激活后会促进细胞内的炎症信号通路的活化进而释放多种炎症促进因子。本论文选择小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为实验对象研究了GLXXV的抑炎活性。首先,采用MTT实验检测GLXXV对RAW264.7的细胞毒性。结果显示:当GLXXV浓度为50μM和100μM时,对细胞存活无影响。然后,采用ELISA等实验检测GLXXV与LPS单独或共同处理RAW264.7细胞24 h后,其炎症相关因子TNF-α、IL-6和NO的释放量。结果表明:GLXXV单独处理组与空白对照组相比上述因子释放量并无明显变化,说明GLXXV无促炎活性;LPS处理组的TNF-α、IL-6和NO的释放量明显上调;而GLXXV与LPS共同处理组的TNF-α、IL-6和NO的释放量显著下调。表明人参皂苷GLXXV具有抑制LPS诱导的巨噬细胞炎性反应的活性。接下来进一步研究了GLXXV抑制炎症反应的机制。我们发现:LPS可引起RAW264.7细胞内的ERK、JNK、p38发生磷酸化,而GLXXV可以显著抑制LPS引起的RAW264.7细胞内的上述蛋白的磷酸化。LPS处理RAW264.7细胞能同时诱导IκBα蛋白的降解和NF-κB的磷酸化,而GLXXV可以抑制LPS诱导的这两种蛋白的变化。采用免疫荧光检测了NF-κB在细胞内的分布。结果显示:GLXXV能够抑制LPS引起的NF-κB核移位。以上结果说明GLXXV通过抑制ERK、JNK、p38和NF-κB的磷酸化抑制LPS引起的巨噬细胞炎性反应。GLXXV与糖皮质激素的结构和活性相似。采用si RNA敲低糖皮质激素受体（GR）的表达后,检测GLXXV对炎性相关细胞因子表达的影响。结果表明:在GR被敲低的RAW264.7细胞中,GLXXV对LPS刺激引起的ERK、JNK、p38和NF-κB的磷酸化以及TNF-α和IL-6释放量的抑制作用明显减弱。说明GR可能是GLXXV发挥抑炎活性的受体。此外,我们建立了DSS诱导的结肠炎小鼠模型,在动物水平检测GLXXV抑制结肠炎的活性。分别设置空白对照组、DSS模型组、DSS+10 mg/kg GLXXV灌胃给药组和DSS+20 mg/kg GLXXV灌胃给药组。结果表明:与空白对照组相比,DSS模型组的小鼠的结肠长度明显缩短,结肠组织损伤严重。采用Western-blot检测肠道蛋白水平的变化。结果显示:磷酸化的ERK、JNK、p38和NF-κB的含量增加;肠道的紧密连接蛋白Occludin、ZO-1和Claudin蛋白含量下调。GLXXV可以抑制DSS引起的上述肠道组织变化。采用血细胞分析仪检测小鼠血液的变化情况。结果显示:DSS模型组血清中的TNF-α,IL-6的含量显著上调,同时白细胞含量有一定上调,而GLXXV可以抑制血液中各炎性因子的变化。此外,对小鼠胸腺、脾脏、肾脏和肝脏进行称重,发现DSS模型组的脾脏重量上调,胸腺重量有一定下调,而GLXXV可以抑制这种变化。肾脏和肝脏重量无明显变化。综上,人参皂苷GLXXV可能通过糖皮质激素受体抑制MAPK和NF-κB的活化,进而发挥抑炎活性。