Rbm24对心肌相关基因的调控机制的研究

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目的:  研究在心肌细胞分化和发育过程中,Rbm24蛋白发挥功能和产生的影响。寻找Rbm24结合的相关基因的不同水平的RNA,以及结合目的RNA后所发挥的功能,为降低Rbm24的表达导致扩张性心肌病等一系列心肌受损和功能紊乱相关疾病探究原因,寻找相关的信号通路,提供一定的实验及理论依据,为成功解决心脏疾病难题寻找重要的攻克点。  方法:  通过Western blot免疫印迹检测Rbm24和其他心肌相关蛋白在C2C12细胞分化中蛋白的表达情况,并用western blot免疫印迹法来观察各种心肌细胞系中Rbm24的蛋白水平表达情况,通过在心肌细胞中用siRNA干扰技术在在心肌细胞中敲低Rbm24,观察敲低后的心肌细胞结构和功能的变化及影响。构建Rbm24的过表达细胞系,利用rip-chip技术寻找Rbm24结合的靶基因mRNA,并用荧光素酶报告系统和GFP报告系统进行寻求Rbm24的结合区域。  结果:  在C2C12分化的过程中,Rbm24和一些心肌结构蛋白如ACTN2和TNNT2开始表达,在小鼠心肌细胞HL1中,我们敲低Rbm24后发现ACTN2和TNNT2表达量都有降低,并在H9C2中过表达Rbm24利用RIP-chip技术进一步验证了Rbm24蛋白的靶基因Chrm2,同时,在心肌细胞中敲低Rbm24后,Chrm2 mRNA表达上升。我们还通过GFP报告基因系统和荧光素酶报告基因系统找出Rbm24蛋白结合在Chrm2 mRNA分子的CDS区的大致区域。  结论:  在C2C12细胞分化为过程中表达,并促进其分化,Rbm24是一个至关重要的基因,影响心肌相关蛋白的表达稳定以及正常的心肌收缩功能,这表明Rbm24是心脏早期分化的一个标志,在心脏细胞和肌节稳定中扮演重要角色。Rbm24能够通过结合mRNA调节下游基因的表达来对心脏分化以及心肌细胞的功能进行调控。
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