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中草药饲料添加剂以其天然低毒、高效绿色的特色在饲料行业中占据着重要的地位。本文以黄芪(RadixAstragali)、黄芩(Radixscutellariae)、杜仲(Eucommiaulmoides)、甘草(Glycyrrhizauralensis)及其复方对7种水产动物常见的病原菌进行体外抑菌活性的考察,从中筛选出抑菌活性较好的配方,然后以该配方制成中草药提取液注射或者浸泡锯缘青蟹(Scyllaserrata)成蟹、作为饲料添加剂投喂一龄草鱼(Ctenopharyngodonidellus),以复方中草药对锯缘青蟹和草鱼的非特异性免疫能力的影响为指标,并结合对其免疫保护率的影响,评价该复方是否合适作为免疫增强剂。最终并确定该复方的主要成分。 结果表明:复方4对大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、温和气单胞菌(Aeromonassobria)、鳗弧菌哈维氏弧菌(Vibrioanguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)7种水产动物病原菌有较强的体外抑制活性,其抑菌圈分别为11.33、11、10、17、10、11.67、13.33mm;最低抑菌浓度(MIC)分别为为62.5、31.25、125、15.63、31.25、31.25、31.25mg/ml;最小杀菌浓度(MBC)分别为125、62.5、125、31.25、125、31.25、31.25mg/ml。 该复方药液注射锯缘青蟹,分析青蟹血淋巴中的酚氧化酶(phenoloxidase,PO)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)、酸性磷酸酶(acidphosphatase,ACP)、过氧化物酶(peroxidase,POD)、超氧化物歧化酶(superoxidedismudase,SOD)、溶菌酶(lysozyme,LZM)等相关的非特异免疫因子活力。结果表明,青蟹血清酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、溶菌酶的活力和血清抗菌活力比对照组显著提高(p<0.05),除超氧化物歧化酶外,各种免疫酶活力在注射后先缓慢上升,术后2天达到最高值,然后缓慢下降,至第4天基本回复到正常水平。用副溶血弧菌攻毒7天后,注射复方中药提取液的锯缘青蟹,其免疫保护率达到53.33%。 不同浓度的该复方药液浸泡锯缘青蟹,分析青蟹血淋巴中的酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、溶菌酶等相关的非特异免疫因子活力。结果表明:在浸泡7天时,高浓度组青蟹血清酚氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、过氧化物酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶的活力和血清抗菌活力比对照组显著提高(p<0.05);低浓度组青蟹溶菌酶、过氧化物酶活力比对照组显著提高(p<0.05);各种免疫酶活力在浸泡后先缓慢上升,2天达到最高值,然后缓慢下降,至4天基本回复到正常水平。用副溶血弧菌攻毒7天后,高浓度组的免疫保护率达到20%,低浓度组的免疫保护率为10%。 将该复方作为饲料添加剂的人工饲料投喂一龄草鱼,分析草鱼血淋巴中的酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力以及血液中白细胞总数、白细胞吞噬功能等免疫指标。结果表明:低浓度组的草鱼血淋巴酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和超氧化物歧化酶活力以及血液白细胞总数、白细胞吞噬指数和白细胞吞噬率比对照组和高浓度组显著提高(p<0.05);随着投喂时间的延长,各种免疫酶活力不断上升,停药后有回落的趋势。用副溶血弧菌攻毒7天后,高浓度组的免疫保护率达到30.7%,低浓度组的免疫保护率为53.9%。 利用紫外分光光度法对该复方的主要成分进行了粗略地分析,初步确定了该复方中的总糖、总蛋白、总黄酮、绿原酸、黄芩苷的百分含量分别为7.097%、0.06%、2.62%、1.544%、2.07%。