针刺足三里调节功能性消化不良小鼠脑肠肽及SCF/c-kit信号通路的研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yfs245324210
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目的:  本研究以FD小鼠为研究对象,以影响胃肠动力的ICC、SMC作为靶点,从讨论影响ICC、SMC的关键环节脑肠肽、SCF/c-kit信号通路入手,探讨针刺治疗功能性消化不良的效应及其作用机制。  方法:  采用60只SPF级别的c57bl小鼠,随机分为空白对照组、模型组、针刺组、ACK2模型组、ACK2针刺组5个组,每组12只小鼠。除空白组以外,其他四组小鼠均按照饥饱失常+左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg)综合造模法造模。在造模第5天时,给予ACK2模型组、ACK2针刺组腹腔注射c-kit中和抗体(ACK2),50μg/天,共10天,其余组注射同等剂量的生理盐水。造模结束后,禁食不禁水24h,每组随机抽取6只小鼠进行灌胃半固体糊0.5g/只,15min后脱颈后处死小鼠,剖开腹腔取胃组织,检测胃排空率,并在光镜下观察胃粘膜组病理组织变化,以此明确造模成功。造模结束后,给予针刺组、ACK2针刺组针刺治疗,针刺治疗时间为7天。在针刺治疗结束后,禁食不禁水24h,采用灌胃半固体糊0.5g/只的方式检测胃排空,用放射免疫法测定血清及胃窦组织中Ghrelin、CCK含量,用免疫印记法(Western Blot)检测胃窦中SCF、c-kit蛋白含量,用QPCR检测胃窦中SCF、c-kit mRNA表达,以及采用免疫荧光检测ICC及SMC的荧光密度值。  结果:  1.各组小鼠饮食量、体重比较:与空白组相比,模型组小鼠饮食量、体重明显减少(P<0.05)。与模型组相比,针刺组小鼠饮食量、体重均有明显增加(P<0.05)。  2.各组小鼠胃排空比较:与空白组相比,模型组小鼠胃残留率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组相比,针刺组小鼠胃残留率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。  3.各组血清及胃窦Ghrelin比较:与空白组对比,模型组小鼠血清及胃窦组织中Ghrelin含量均有所下降,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组对比,针刺组小鼠血清及胃窦组织中Ghrelin含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。  4.各组血清及胃窦CCK比较:与空白组相比,血清及胃窦组织中CCK含量均有所升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组对比,针刺组小鼠血清及胃窦组织中CCK含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。  5.胃窦SCF、c-kit蛋白比较:与空白组比较,模型组小鼠胃窦组织中的SCF和c-kit的蛋白含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,针刺组小鼠胃窦组织中的SCF、c-kit的蛋白含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),ACK2模型组小鼠胃窦组织中c-kit的含量显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。  6.各组胃窦c-kit的mRNA比较:与空白组比较,模型组小鼠胃窦组织中的SCF和c-kit的mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,针刺组小鼠胃窦组织中的SCF和c-kit的mRNA表达上升,ACK2模型组小鼠胃窦组织中SCF和c-kit的mRNA含表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。  7.ICC细胞c-kit受体光密度值:与空白组比较,模型组小鼠胃窦组织中ICC细胞c-kit受体光密度值降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组小鼠胃窦组织中ICC细胞c-kit受体光密度值升高。与针刺组相比,ACK2针刺组小鼠胃窦组织中ICC细胞c-kit受体光密度值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。  8.SMC细胞VAchT受体光密度值:与空白组比较,模型组小鼠胃窦组织中SMC细胞VAchT受体光密度值降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,电针组小鼠胃窦组织中SMC细胞VAchT受体光密度值升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与针刺组相比,ACK2针刺组小鼠胃窦组织中SMC细胞VAchT受体光密度值降低,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:  1.针刺能增加FD小鼠饮食量、体重以及加速胃排空运动,从而改善胃肠动力。  2.针刺可以改善脑肠肽Ghrelin、CCK含量,从而改善胃肠动力。  3.针刺可以增加SCF、c-kit蛋白含量及mRNA的表达来达到改善SCF/c-kit信号通路,从而改善ICC功能,以达调节胃肠动力的作用。  4.针刺可以增加ICC、SMC上c-kit和VAchT受体的光密度值,促进ICC和SMC的功能恢复,进而改善胃肠动力。  5.针刺通过调节脑肠肽含量从而达到改变ICC与SMC的功能,是与SCF/c-kit信号通路相关的。
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