许多遗传因素和环境因素共同促进了肿瘤的形成，DNA甲基化为它们之间的相互作用提供了纽带。众所周知，正是机体固定的DNA甲基化的模式在很大程度上保证了基因组的稳定性和正常基因的表达。然而，在肿瘤中这种理想的平衡状态被许多肿瘤抑制基因中被称为CpG岛的调控区异常甲基化所打破。相关的肿瘤抑制基因有：BRCA1、hMLH1、p16INK4A、APC、VHL等，这种CpG岛的异常甲基化导致了它们的转录抑制。所以许多学者认为CpG岛的异常甲基化与肿瘤形成及衰老密切相关。p16基因甲基化异常在人类许多肿瘤包括胃癌中均可见到，其它肿瘤如淋巴瘤、前列腺癌、乳腺癌、食管癌、肺癌等。过去对胃癌p16基因甲基化研究多集中在外显子甲基化异常与肿瘤关系，而对p16基因启动子CpG岛甲基化状况与胃癌发生发展的相关性报道较少。 由于甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR，MSP)这一新技术的进展，使得更多的甲基化位点被研究。相比于Southern杂交法和甲基化敏感性酶切的PCR分析法，它不仅能弥补此两种方法的缺点，自身还具有众多显著优点。MSP避免了应用限制性酶及由此造成的酶切不完全的问题，同时还有灵敏度高、特异性强且适合异质性样本等优点。本实验用MSP法检测了胃癌、癌旁及正常组织p16基因启动子5’CpG岛甲基化状况。目的是探讨p16基因启动子CpG岛异常甲基化状态及异常甲基化的发生与胃癌患者的临床病理特征的关系。郑州大学2004届硕士研究生毕业论文胃癌P16基因启动子5’cPG岛甲基化状态 材料和方法 胃癌手术切除标本32例取自2002一2003年郑州大学第一附属医院、河南省人民医院和河南省肿瘤医院。所有的标本均经病理学明确诊断。患者年龄23一69岁，平均年龄48岁。患者术前均未接受过放疗和化疗。其中，高中分化腺癌7例，低分化19例，粘液腺癌和印戒细胞癌6例。所有组织标本离体后立即置液氮中速冻然后保存于一80℃。用MSP、非变性聚丙烯凝胶电泳和PCR产物测序分析检测胃癌、癌旁和正常组织p16基因启动子5’CpG岛甲基化发生状况，并将它们与临床病理资料相结合分析。 采用SPSSIO.0统计软件包进行统计分析，以尸<0.05为有统计学意义。 结果 1.胃癌组织、癌旁组织和正常组织p16基因启动子5’CPG岛甲基化率分 别为56.25%、25%和6.25%，胃癌组织与正常组织甲基化发生率的差别 具有显著性，尸<0.05。 2.胃癌患者中，33.33%的高中分化腺癌与57.8%的低分化腺癌有P16基因 启动子5’CpG岛甲基化，二者甲基化发生率的差别具有显著性，尸< 0 .05。 3.有淋巴结转移组甲基化率为73.7%显著高于无淋巴结转移组，尸<0.05。 4.胃癌组织p16基因启动子CPG岛甲基化率随浸润深度的增高而增高， 但在统计学上差异无显著性，尸>0.05。 5.胃癌患者中，男女患者的甲基化率分别为33.33%和50%，差别无显著 性(尸>0.05);<50岁患者与)50岁患者甲基化率分别为47%和 66.7%，差别无显著性(尸>0.05);肿瘤大小大于或小于3cm的患者甲 基化率的差异无显著性(尸>0.05)。 结论 1.MSP是检测CPG富含区甲基化状态的一种简单、敏感和特异的方法。 2.胃癌组织p16基因启动子5’CPG岛甲基化显著高于正常组织，说明该 基因上游调控序列的甲基化可能是胃癌形成过程中的一个重要分子标志。郑州大学2004届硕士研究生毕业论文胃癌P16基因启动子5’CpG岛甲基化状态3.低分化腺癌p16基因启动子cpG岛甲基化率高，表明p16甲基化频率 与肿瘤的分化程度密切相关。4.CpG岛甲基化的程度与淋巴结转移密切相关，其甲基化在胃癌恶性进 展中起重要作用，可以考虑作为估计胃癌患者预后的一个指标。5.胃癌中p16基因启动子甲基化与患者的年龄、性别、浸润深度及肿瘤大 小等临床病理因素无关。