【摘 要】
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近年来,肥胖逐渐被认识到是导致动脉粥样硬化和心血秘疾病的重要危险因素之一.并在许多代谢性疾病如高甘油脂血症,高血压,主胰岛素血症和非胰岛素依赖性糖尿病等有着密切的相
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近年来,肥胖逐渐被认识到是导致动脉粥样硬化和心血秘疾病的重要危险因素之一.并在许多代谢性疾病如高甘油脂血症,高血压,主胰岛素血症和非胰岛素依赖性糖尿病等有着密切的相关性.体外进行肥胖研究主要是用3T3-L1或3T3-F442A作为模型.在3T3-L1细胞分化为脂肪细胞的过程中,胰岛素（Iinsulin,Ins),地塞米松（dexamethasone,Dex)及甲基异丁基黄嘌吟（methylisobutylxanthine,Mix)是前脂肪细胞转化为成熟脂肪细胞的关键诱导因子.该文首先检测了在3T3-L1细胞分化过程中,Ins,Dex及Mix对PAI-1基因表达的影响.然后分析并鉴定了小鼠PAI-1启动子中影响PAI-1表达的Ins和Dex及C/EBPs顺式作用元件（cis-acting element),最后在C57BL/6J小鼠中观察了Ins,Dex对小鼠附睾脂肪垫中PAI-1基因表达的影响.一胰岛素、地塞米松和甲基异丁基黄嘌呤对3T3-L1前脂肪细胞分化过程中PAI-1基因表达的影响;为研究胰岛素,地塞米松和甲基异丁黄嘌呤对脂肪细胞分化过程及纤溶酶原激活剂抑制剂-1（PAI-1）基因表达的影响.利用体外培养的3T3-L1细胞分化模型,观察了胰岛素与地塞米松及甲基异丁黄嘌呤加入前后脂肪细胞形态的变化.并应用RT-PCR方法,在不同浓度的Ins,Dex和Mix及其不同组合的条件下,对3T3-L1细胞分化为脂肪细胞过程中PAI-1mRNA表达水平进行相对定量分析（以β-actin为内对照）.我们的研究结果表明：在Ins,Dex,Mix三因子单独及其不同组合,Ins,Dex单独及Ins加Dex都对3T3-L1细胞中PAI-1基因的表达有显著促进作用,尤以后者最为显著并表现出叠加效应,这为进一步研究PAI-1启动子上的相应顺式元件,搜寻Ins,Dex对PAI-1基因表达的作用机制提供了实验基础.二小鼠PAI-1基因启动子中Dex和C/EBPs顺式作用元件的分析和鉴定;在研究了Ins,Dex和Mix对脂肪细胞分化过程中PAI-1基因表达的影响的基础上,进一步探讨Ins,Dex调控PAI-1基因转录表达的机制,应用限制性内切酶,PCR扩增和DNA重组技术,构建含萤光素酶(Luciferase)基因和PAI-1启动子（Promoter)不同长度片段的嵌合质粒,转染3T3-L1前脂肪细胞并测定报告基因（Luciferase)的活性.结果提示：Dex可能是通过激活转录因子（糖皮质激素受体,GR）与DexRE的结合来促进PAI-1基因的表达,同时在完全分3T3-L1脂肪细胞中,C/EBPa与GR对PAI-L1基因表达的促进作用.可能因二者与各自顺式元件的竞争性结合而减弱,这方面有待进一步的研究.三胰岛素和地塞米松对小鼠体内脂肪组织中PAI-1基因表达的作用.以上的研究表明;Ins,Dex在体外能够显著促进PAI-1基因的表达,但在动物体内情况是否如此,特别是体骨Dex调控PAI-1基因表达的机制是否与体外相同.仍未见报道.
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