乳酸杆菌对DSS-诱导的小鼠溃疡性结肠炎的抑制作用

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Mike_sun
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乳酸杆菌属于肠道正常菌群,参与调节机体免疫应答,以维持肠道微生态的平衡。越来越多的研究发现,乳酸杆菌作为一种益生菌,具有多种免疫调节活性。但是,目前关于乳酸杆菌菌株对肠炎的调控作用在体内的研究较少。本课题预实验研究DSS的作用时间,构建DSS-诱导小鼠肠炎模型。分为四个组,分别记录每组的体重变化和生活状态变化、进行DAI评分比对、测量小鼠结肠长度和脾脏重量变化,并结合小鼠的结肠组织进行病理结构分析(HE染色),确定小鼠肠炎炎症的严重程度。在后期实验中观察小鼠的死亡率,结合HE经过综合分析,建立了DSS诱导的肠炎模型。乳酸杆菌L.paracasei M5-L、L.casei Q8-L和LGG对DSS诱导的小鼠肠炎的调节作用中,DAI评分表明三种乳杆菌能不同程度的减轻小鼠患病症状。通过小鼠脏器重量和结肠长度说明DSS能引起肠炎,三种乳酸杆菌均能不同程度改善肠炎导致的结肠变短脾脏变重状况。对小鼠结肠进行HE染色后,观察组织切片并且进行组织学评分证实L.casei Q8-L、L.paracasei M5-L和LGG能不同程度的缓解肠炎带来的组织学损伤状况。炎症的发生会导致机体自由基增多,超氧化物歧化酶(SOD)能清除自由基,因此SOD含量与炎症严重程度呈负反馈趋势,实验表明L.paracasei M5-L、L.casei Q8-L和LGG三种菌株能提高SOD含量,减轻炎症。通过测定MPO试剂盒小鼠结肠中的MPO,ELISA法测定小鼠血清中IL-6和TNF-α含量,发现乳酸杆菌L.casei Q8-L、L.paracasei M5-L和LGG都能下调DSS刺激的小鼠产生的MPO,IL-6和TNF-α含量,上调IL-10含量。其中,L.casei Q8-L组调节效果最显著,实验表明,L.casei Q8-L组小鼠IL-6含量降低到52.37pg/m L,IL-10含量提升到20.07pg/m L,乳酸杆菌作用于IκB-α激酶减少其磷酸化,减弱对P65-P50二聚体的激活,通过下调NF-κB信号通路中P65、P50蛋白的表达来调节肠道炎症。并且通过用RTPCR测定TLR4和TLR9的基因表达量,发现乳酸杆菌下调了炎症因子IL-6和TNF-α的含量,与TLR4和TLR9的基因表达量调节效果一致,在基因水平上说明三株乳酸杆菌能抑制DSS刺激小鼠分泌的TNF-α,并且TLR4和TLR9受体在乳杆菌调节肠道炎症时起到关键作用。这些结果表明选择的乳酸杆菌菌株能够显著调节体内肠炎且对小鼠肠炎具有潜在的调节作用。
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