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背景:勃起功能障碍(ErectileDysfunction,ED)是泌尿男性科最常见的疾病之一。衰老被认为是ED的高危影响因素。虽然目前Sildenafil(万艾可,伟哥)用于治疗ED疗效较好,但部分医生及患者有只满足于勃起功能的暂时改善,而忽略对ED病因进一步探讨及防治的趋向。若干年以后,可能出现大量sildenafil难以治疗的ED患者,其阴茎组织的严重纤维化等变化将是难以逆转的。而目前对引起ED器质性改变的机制仍不很清楚,更没有理想的方式进行预防。ED患者阴茎组织中平滑肌细胞减少,多数观点认为是平滑肌细胞向成纤维细胞转化所致,但注射抑制平滑肌纤维化的反义TGFβ,效果不佳。我们推测:平滑肌纤维减少更重要的原因可能是平滑肌细胞衰老过快所致。 目的:探讨衰老对大鼠刚茎组织结构、NO-cGMP通路及端粒酶的影响及Tankyrasel、hTERT基因转染对平滑肌细胞生物学行为的作用研究。 方法:本课题以不同月龄大鼠阴茎组织及培养的平滑肌细胞为对象,进行以下研究:(1)检测不同月龄大鼠阴茎组织中NO量、NOS活性、NOS表达、cGMP量、端粒酶活性及海绵体结构的变化,并比较大鼠、人阴茎组织及各自来源的原代海绵体平滑肌细胞的端粒酶活性;(2)原代培养大鼠海绵体平滑肌细胞,构建正义Tankyrasel真核表达载体,转染大鼠海绵体平滑肌细胞,对转染正确性鉴定并测定转染后平滑肌细胞端粒酶活性、细胞分裂指数、细胞凋亡及细胞生长曲线;(3)行人海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定,构建hTERT基因荧光真核表达载体及鉴定,采用脂质体法将hTERT-IRES2-EGFP正义重组质粒转染人海绵体平滑肌细,对转染正确性鉴定并测定转染后平滑肌细胞端粒酶活性、细胞分裂指数、细胞凋亡及细胞生长曲线。 结果:1.大鼠阴茎组织中NO量、NOS活性均先升高后降低,各月龄组间有显著差异。NOS主要表达于阴茎组织平滑肌细胞胞浆内,内皮细胞内含量较少,随龄增加,NOS表达逐渐减少,以2月龄鼠最丰富,24月龄鼠最少。阴茎组织cGMP含量逐渐降低,各月龄组间差别显著。随龄增加,平滑肌纤维逐渐减少,胶原纤维增多,粗大