论文部分内容阅读
第一部分 氰戊菊酯、辛硫磷对大鼠卵巢功能影响的整体实验研究 研究氰戊菊酯(Fen)、辛硫磷(Pho)对大鼠卵巢内分泌干扰作用及抗氧化系统功能的影响。应用Fen、Pho对雌性SD大鼠进行经口染毒，剂量分别为1.91、9.55、31.80mg／kg和5.88、29.4、98mg／kg，对照组给予等量色拉油。阴道脱落细胞涂片法观察动情周期变化。连续染毒30d后处死，分离卵巢、子宫、脑、肝、脾、肾、肾上腺等脏器，计算脏器系数；分光光度法测定大鼠卵巢组织和血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)的活性以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量；放射免疫法测定血清中雌二醇 南京医科大学硕士学位论文 (E:)和孕酮(P;)的水平;提取卵巢组织的DNA，进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA完整性;免疫组化SP法观察bc人2蛋白在卵巢组织中的表达;运用光镜和电镜观察卵巢组织和细胞超微结构的变化。 结果显示:Fen各染毒组大鼠的动情前期和动情后期缩短，与对照组相比，在1.91mg瓜g和31.80mg/kg组具有显著性差异;动情期和动情间期则延长，31.80mg/kg组的动情间期持续时间明显比对照组短;各组动情周期异常率均高于对照组，在31 .80m眺g组差异具有显著性。各染毒组大鼠的卵巢、子宫重量均降低，在31.80m眺g组具有显著性差异;卵巢SOD、GST和GSH水平均增高，其中各剂量组GST活力均显著增强，MDA含量降低;血清中SOD、GST水平降低，MDA含量升高;血清中EZ含量显著高于对照组，P4含量则逐渐下降，在9.55mg/kg和31 .80m眺g组与对照组相比差异具有显著性;卵巢bcl一2蛋白表达增强，在9.55m留kg组差异具有显著性。Pho各染毒组大鼠的各动情周期未见明显变化，但动情周期异常率均高于对照组，在98mg瓜g组差异具有显著性;体重增长均低于对照组，其中98mg/kg组与对照组相比差异具有显著性;各染毒组大鼠的卵巢、子宫重量均显著降低;卵巢SOD、GST和GSH水平均增高，MDA含量降低，血清中SOD、GST水平显著降低，MDA含量升高;各剂量组E:含量降低，P;含量升高，但与对照组相比差异均无显著性;卵巢bcl一2蛋白表达增强，在5.88mg瓜g组显著具有显著性。Fen、Pho各剂量组的大鼠卵巢组织DNA完整、无凋亡样断裂。光镜下观察，Fen、Pho各组闭锁卵泡增多，但与对照组相比差异均无显著性。电南京医科大学硕万}学位论文镜下观察:在Fen 31 .80mg/kg组可见卵巢黄体细胞部分内质网肿胀;线粒体呈空泡状，峪消失;核仁边聚。Pho 29.4m留kg组卵巢黄体细胞胞浆内脂滴增大、质不均，峪消失。以上结果提示:增多;在31.核膜不完整;线粒体扩张，出现空泡，基80mg/kg剂量下，Fen对大鼠的动情周期和激素分泌有明显的干扰作用，而Pho的作用不明显。在1.91、9.55、31.somg/kg剂量和5.88、29.4和98mg/kg剂量下，Fen、pho均能使卵巢的抗氧化能力代偿性增强，Pho的作用更为明显，但尚未对卵巢的抗氧化系统功能造成损伤。关健词:氰戊菊醋;辛硫磷;大鼠;卵巢;动情周期;bcl-2第二部分氛戊菊醋、辛硫磷对大鼠卵粱颖拉细胞线拉体功能的影响 研究Fen、Pho对卵巢颗粒细胞线粒体功能的影响，为探讨其内分泌干扰作用机制提供依据。原代培养大鼠卵巢颗粒细胞(rGCS)，分别用Feno、5、25、1 25协mol/L或PhoO、5、25、1 25林mol/L处理细胞24h。MTT试验检测线粒体酶活力;二乙酞二氯氢化荧光素(DCFH一DA)负载，流式细胞术检测细胞内ROS水平;碘布七丙唆(PI)和罗丹明123(Rh123)双标记，流式细胞术检测细胞活力和线粒体膜电位(MMP);生物发光法检测细胞内ATP水平。 结果显示:Fen引起细胞内ROS水平升高，25和1 25月mol几与对照组相比差异具有显著性;PI的荧光强度下降，细胞活力降低，25 南京医科人学硕士学位论文似mol几和125尽mol几组与对照组相比差异具有显著性;细胞损伤率逐渐升高，与对照组比较，25、125拼mol/L组差异具有显著性意义;反映线粒体酶活性的MTT OD值显著升高，5、25、1 25尽mol几组与对照组相比，差异均具有显著性;反映线粒体膜电位的Rh123荧光强度比对照组明显升高;细胞ATP水平呈明显的下降趋势，各剂量组与对照组相比差异均具有显著性。Pho染毒后，细胞内ROS产生增加，其中5林mol几组明显高于对照组;PI荧光强度升高，在125月mol几组与对照组相比差异具有显著性。细胞损伤率逐渐升高，与对照组相比，125林mol几组差异具有显著性。MTT OD值升高，但各剂量组与对照组相比，差异均未见显著性。Rh123荧光强度上升，但与对照组相比，各剂量组差异均未见显著性。与对照组相比，各剂量组的细胞ATP水平随染毒剂量降低，但差异均未见显著性。 以上结果提示:Fen、 Pho能引起大鼠卵巢颗粒细胞的损伤，表现为细胞损伤率增加，ATP水平下降。但Fen并非通过影响线粒体功能而损伤细胞，Fen使细胞活力增强，促进线粒体功能，使线粒体膜电位增加，线粒体酶活性增强;Pho对线粒体功能作用不明显。