黄绿青霉素(citreoviridin,CIT)主要是黄绿青霉菌(PenicilliumCitroe-Viride)在一定条件下产生的具有生物毒性的小分子代谢物。业已证明，CIT是一种具有心血管毒性、神经毒性和遗传毒性的真菌毒素。关于CIT与人类疾病的联系，首见于20世纪50年代日本“黄变米事件”，当时怀疑它是急性心脏型脚气病(acutecardiacberiberi)的原因，但未进一步证实。2000年，杨建伯教授根据既往现场流行病学调查结论和近年来实验研究结果，提出CIT是克山病的可疑致病因子，经病区产谷物传播。 本课题通过改进生物合成与提纯技术，生产了足量的实验用CIT毒素。以此毒素低剂量饲喂大鼠，观察心肌细胞病理形态和线粒体呼吸链关键酶表达活性变化，为揭示CIT致克山病心肌线粒体损伤的分子机理提供实验基础。 1、CIT生物合成方法的改进。黄暗青霉菌接种于已高压灭菌的大米中混匀，培养数日后，将霉变大米的乙醇提取液，旋转蒸干，溶于苯，浓缩后得到的粗毒素在硅胶柱上层析，依次用苯、乙醚、乙酸乙酯、丙酮洗脱，收集乙酸乙酯部分浓缩，4℃放置2天后结晶。所得产物经高效液相色谱检测成分较单一，纯度较高。 2、CIT致大鼠心肌损伤的形态学观察。染毒一个月后，取大鼠心室肌进行病理形态观察。光镜下：0.5mg/kg、1.5mg/kg染毒剂量组心肌组织均未见病变；而3mg/kg染毒剂量组大鼠心肌细胞坏死，空泡变性，部分肌纤维溶解，横纹消失。电镜下：0.5mg/kg染毒剂量组心肌细胞未见明显改变；1.5mg/kg染毒剂量组核周隙增宽，高密度染色质轻度边集，线粒体肿胀，部分线粒体嵴髓样改变，肌浆网扩张，肌质密度下降；3mg/kg染毒剂量组心肌细胞线粒体呈弥漫性空泡变性，嵴絮状改变；核固缩，但核膜清晰，染色质形成高密度板块，散在分布，似凋亡性改变。这些超微结构病变呈剂量效应关系。 3、CIT对大鼠心肌细胞线粒体呼吸链关键酶表达活性的影响。本实验通过酶组织化学染色，发现CIT(1.5mg/kg)可导致大鼠心肌组织细胞色素C氧化酶(cytochromeCoxidase，COX)和琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase，SDH)活性明显减弱，且酶活性降低早于细胞坏死，图像分析有统计学意义。同时，定磷法检测ATPase活性下降。 本研究的创新点：改进了黄绿青霉素生物合成方法，使产量更多、操作更简便； 首次用酶组织化学染色法观察CIT对心肌线粒体关键酶COX、SDH表达活性的影响。