Caenorhabditis elegans对重金属离子Cd<'2+>、Pb<'2+>和Zn<'2+>的反应以及利用RNAi研究几种影

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本文研究了秀丽小杆线虫Caenorhabdits elegans对重金属Cd、Zn、Pb的反应以及利用RNAi对影响C.elegans寿命的一些因素进行了研究。 首先研究了三种重金属对秀丽小杆线虫的毒害作用。结果表明:24h时,三种重金属的毒性为:Pb>Cd>Zn,半致死浓度分别为4177μg·L-1、65945μg·L-1、113323μg·L-1;48h时,三种重金属的毒性为Pb>Cd>Zn,半致死浓度分别为31567μg·L-1、3867μg·L-1、6342μg·L-1;72h时,三种重金属的毒性为Cd~Pb>Zn,半致死浓度分别为2466μg·L-1、2494μg·L-1、4066μg·L-1。三种重金属的毒性中Cd随时间变化的速度最快,Pb随时间变化的速度最慢;Pb随浓度的变化最快,Zn随浓度变化最慢。 重金属浓度对C.elegans联合作用的影响的实验表明:当Cd和Zn共同作用于线虫时,在低浓度时,呈现出简单的相加作用,高浓度时,呈现出拮抗作用;Pb和Zn共同作用于线虫时,四个浓度都呈现出简单的相加作用;当Cd和Pb共同作用于线虫时,低浓度呈现出简单的相加效应,高浓度呈现出协同作用。 用AI指数法分析C.elegans暴露重金属的时间对重金属联合作用的影响,结果表明:当Cd和Zn以1:2的质量比混合时,在24h、48h和72h,其相加指数AI均小于0,联合作用表现为拮抗作用;当Pb和Zn以1:2的质量比混合时,在24h、48h和72h,其相加指数AI均小于0,联合作用表现为拮抗作用;当Cd和Pb以1:1的质量比混合时,在24h,其相加指数大于0,联合作用表现为协同作用;在48h和72h,其相加指数均小于0,联合作用表现为拮抗作用。 利用转基因线虫PC72,发展了一种可用于生物监测的高灵敏度的生物监测器。实验结果表明:在三种重金属的毒害下,染色率都呈现出随致死率变化而变化的特点,延长毒害时间能增加其染色率,空白对照即便染色时间延长也未曾出现明显的染色率增加。利用计分法评估线虫的染色效果,得分也和染色率呈现出相关变化。与致死率相比,用染色评估水体毒性的方法更加快捷、灵敏。 转基因线虫PC72染色的方法用于检验厦门海域海水水质取得了比较好的效果,检测结果显示染色率与致死率的变化趋势相同,染色率与致死率相关,但利用染色率检测能够缩短检测时间,提高监测灵敏度。 其次利用RNAi法研究了几种影响C.elegans寿命的基因。构建了四个RNA干扰载体:R148.3a、Cnfkb(C.elegans nfkb like)、sqv-4、helicase。将四种食物喂食线虫,研究其对线虫寿命的影响。 R148.3a(RNAi)菌喂食的线虫呈现出产卵数目下降,寿命缩短的特点,并且会使N2、daf-2(e1370)、daf-16(mu86)突变体的免疫力下降。 Cnfxb(RNAi)菌喂食N2线虫并不能使其寿命发生明显变化,但却会使其免疫力下降,易于被金黄色葡萄球菌感染。同时Cnfxb缺失使免疫力下降的作用依赖于daf-16,当daf-16突变时,Cnfxb不能使daf-16突变体的免疫力进一步下降。 helicase(RNAi)菌喂食的线虫,产卵数目较对照N2下降,寿命缩短了2.9天。同时helicase功能的缺失会使线虫幼虫部分致死。 sqv-4(RNAi)菌喂食的线虫,产卵数目大幅度下降,并有很强的胚胎致死能力,所产的卵大多数无法孵化成幼虫。同时sqv-4干扰后,线虫的寿命会缩短约1.5天。 lin-28(n1119)突变体寿命相对于N2延长了8%,lin-4(e912)突变体寿命相对于N2缩短了47%,let-7(n2853)寿命相对N2缩短了36%。然而双突变体lin-28(n719);lin-4(e912)的寿命相对于lin-28(n1119)无明显改变,说明lin-28位于,lin-4下游。
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