捕蝇草的组织培养和植株再生

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捕蝇草(Dionaea muscipula Ellis)是一种叶片特化程度很高的食虫植物,具有较高的观赏价值和作为科普教育材料的意义,也成为研究植物刺激性反应的良好材料。捕蝇草中含有萘醌、4-0-吡喃葡萄糖苷、甲基二羟萘醌和茅膏酮,近年来被用作免疫调节剂、抗麻风病制剂、抗生殖制剂、几丁质合成抑制剂。捕蝇草原产于美国东海岸,常规繁殖方法为播种、分株和扦插等,繁殖效率很低。利用组织培养方法对捕蝇草进行快速繁殖,有利于捕蝇草在国内的产业化发展,而通过染色体加倍,将有可能改良捕蝇草的栽培特性和商品品质。 本研究以捕蝇草的叶柄、叶片和荚子为外植体材料,比较了不同组织的不定芽再生能力的差别。实验结果表明,叶片和荚子外植体的再生能力明显优于叶柄外植体;叶片和荚子外植体在不同的培养基上反应也有差别;成熟度低的叶片外植体的再生能力优于成熟度高的叶片外植体。进一步的实验结果还表明,在不添加任何外源激素的情况下,捕蝇草也能够再生不定芽和不定根;捕蝇草的不定芽再生有直接再生和间接再生两种方式;在1/2 MS+0-0.1 mg/L BA+0.1 mg/L NAA,以及1/2 MS+0-0.01mg/L2,4—D+0.02 mg/L KT两种配方的培养基上都可以实现质量较好的不定芽和不定根再生;在培养基中添加0.15-0.75mg/L TDZ有利于愈伤组织的形成,而所形成的愈伤组织经转移培养到添加0.1 mg/L NAA的培养基上能再分化形成不定芽;外植体在pH为7.0和琼脂浓度为0.45%的培养基上形成不定芽和不定根,不需要继代培养就能够发育成为长势较好的再生植株,实现一步成苗。在不定芽再生状况较好的培养基成分的基础上添加了铜离子、硝酸银、ABA的实验结果表明,0.25 mg/L的铜离子对不定芽再生和不定根的形成有促进作用,而其他处理的作用效果不明显或仅具负面作用。 捕蝇草的快速繁殖除了可以采用上述的不定芽再生的方式外,也可以采用侧芽增殖的繁殖方式。经过增殖培养得到的侧芽比较容易生根,在不同种类和浓度的蔗糖、生长素的培养基条件下均能生根。在所试验的培养基成分因子中,MS和N6大量元素的浓度对生根的影响较大。 诱导染色体加倍包括两个实验内容。第一个实验是将叶片外植体接种到含有不同浓度的秋水仙素(0、10、20、40、80、120、240 mg/L)和添加0.1 mg/L NAA的1/2MS大量元素培养基上,经过60 d的培养结果表明,随着秋水仙素浓度的增加,外植体上形成的不定芽数量减少,长势变差。染色体加倍的情况是,鉴定了20个在秋水仙素浓度为40 mg/L的培养基上形成的植株,确认有2个为嵌合体;鉴定了16个在秋水仙素浓度为80 mg/L的培养基上形成的植株,确认有2个为嵌合体;鉴定了4个在秋水仙素浓度为120 mg/L的培养基上形成的植株,确认有1个为嵌合体:鉴定了4个在秋水仙素浓度为240 mg/L的培养基上形成的植株,确认有3个为嵌合体。第二个实验是将叶片外植体培养在添加有0.1 mg/L NAA和200 mg/L秋水仙素的1/2 MS大量元素培养基上,分别培养14、21、28、35 d后转移到无秋水仙素的培养基上培养。根据根尖细胞染色体的观察结果,来源于在秋水仙素培养基上培养28 d的处理的10个再生植株中有1个是嵌合体。虽然这两个实验都仅能得到嵌合体,但这些嵌合体可作为继续培养的外植体材料,有望通过诱导不定芽再生,最终得到完全加倍的植株。
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