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背景:细丝蛋白(Filamin,FLN)参与血管平滑肌细胞(VSMC)的分化迁移、炎症及细胞信号转导等多方面进程,在动脉发育-成熟-功能健全-老化以及病理性动脉硬化的过程中具有重要生物学意义。利用RNA干扰技术使FLNmRNA表达降低(knock down),抑制FLN在VSMC中的生成,减少或阻断收缩表型VSMC向合成表型转化,从而改变病理状态下VSMC的功能,有可能达到从基因水平上预防或治疗动脉粥样硬化的作用,为脑血管病基因治疗开辟新的途径及基因靶点。材料与方法:培养兔VSMC,设计多条可诱发FLNmRNA表达沉默的SiRNA片段,构建质粒载体并转染细胞,荧光显微镜下观察GFP表达情况鉴定转染效率,实时荧光定量PCR鉴定FLNmRNA抑制效果。Westernblot检测FLN蛋白的表达。利用ox-LDL培养正常及转染细胞后,MTT及3H-TdR细胞内掺入法等了解细胞生长增殖情况。流式细胞仪测量细胞周期及凋亡坏死率。免疫荧光观察凋亡、细胞骨架及细胞形态。免疫组织化学法检测细胞多种蛋白表达情况。电镜观察细胞超微结构变化。结果:设计的三条SiRNA均可有效抑制FLNmRNA的表达,其中7-1、7-2片段抑制效果最明显,可达60%以上。各组FLN蛋白/Actin蛋白的比值与正常细胞或空载体细胞组相比均明显下降。转染组细胞的增殖能力明显低于正常组细胞,凋亡坏死比率相似。两组细胞的形态学、细胞骨架构型及超微结构则未见明显差异。给予ox-LDL后正常组细胞增殖能力明显增强,α-SM-Actin表达降低而FLN表达增高,细胞形态结构及功能学改变均提示多数VSMC向合成表型转化。与正常细胞组相比,FLN表达降低的转染VSMC由收缩向合成表型转化的程度较低,凋亡比例亦低于正常细胞组;细胞骨架及超微结构受损程度相对较轻。