【摘 要】
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维生素B6(VB6)是一类吡啶类化合物的总称。基本类型有吡哆醇(Pyridoxine,PN)、吡哆醛(Pyridoxal,PL)、吡哆胺(Pyridoxamine,PM),对应的磷酸酯型有磷酸吡哆醇(Pyridoxine-5′-
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维生素B6(VB6)是一类吡啶类化合物的总称。基本类型有吡哆醇(Pyridoxine,PN)、吡哆醛(Pyridoxal,PL)、吡哆胺(Pyridoxamine,PM),对应的磷酸酯型有磷酸吡哆醇(Pyridoxine-5′-phosphate,PNP)、磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5-′phosphate,PLP)和磷酸吡哆胺(Pyridoxamine-5′-phosphate,PMP),其中PLP是其重要的辅酶形式,参与涉及氨基酸代谢的多种反应。已有的研究已经确认真核生物、细菌、植物中普遍存在一条相似的PLP补救途径,来实现VB6各化合物之间的相互转换。而吡哆醛还原酶(Pyridoxal reductase,PLR)在生物体内VB6各化合物转换代谢过程中起重要作用,它可以催化PL转换生成PN。 烟草作为一种模式植物,其体内VB6各化合物之间的转换代谢已有研究。在对烟草代谢途径中PLR进行研究时,发现磨碎的烟草溶液体系必须经过35°C水浴后,才能检测出PLR活性。本文通过对烟草叶片PLR的来源、性质的研究,为进一步了解烟草体内VB6的转换代谢,以及烟草与其叶面微生物间VB6转换代谢的相互影响都有重要意义。 本实验通过无菌烟草和有菌烟草在磨碎立即反应、35℃水浴后反应两种条件下,分别测定其溶液体系中PLR酶酶活进行比较分析,确认了烟草叶围微生物是烟草叶片PLR的主要来源。 烟草叶围微生物分离后经过菌落观察与镜检分析结果为,细菌中的优势菌属是芽孢杆菌、假单胞菌,真菌中优势菌属是酵母菌,放线菌中优势菌属是链霉菌属。在同浓度下测定真菌、细菌、放线菌中PLR酶酶活,发现其大小关系为:真菌>细菌>放线菌。通过不同叶面环境下测定叶面微生物数量,得到了烟草叶围微生物数量大小关系为:细菌>真菌>放线菌。 经过对烟草中PLR粗酶在不同反应时间,不同反应pH以及不同反应温度下酶活的测定,得到了此酶在35℃,在pH7.0,反应2h时酶活力最高。经过多种细胞破碎方式的尝试和分级沉淀后,得到了PLR酶是种非细胞质存在形式的酶。
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