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胚胎培养是胚胎工程技术的基础和关键,对胚胎分割、胚胎嵌合、核移植和转基因动物的构建等意义重大。现有的猪植入前胚胎体外培养体系能够支持猪胚胎发育至囊胚,但得到的胚胎在数量上或质量上都不如体内胚胎。也就是说,现阶段的胚胎体外培养体系还不是十分完善,还需要进一步的深入研究,从而建立一个与生理环境十分接近的培养系统。影响胚胎体外培养体系的因素有很多,例如:水、气相、温度、培养基、能量底物、蛋白质添加物、渗透压、抗氧化系统……等等。本实验探讨了更换胚胎培养液及添加FBS、高渗透压和不同浓度维生素E对猪卵母细胞体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响。试验一:在PZM-3培养液中培养7天的胚胎为对照组,在胚胎培养第2天、第4天更换新的PZM-3培养液培养的胚胎为换液组,在胚胎培养第2天更换新的PZM-3培养液、在第4天更换添加10%FBS的PZM培养液培养的胚胎为FBS组。试验二:对照组在PZM-3 (288 mOsmol)中培养7天,蔗糖组和氯化钠组分别在0.05M蔗糖的PZM-3(300-320 mOsmol)和138mM氯化钠(300-320 mOsmol)的PZM-3中培养2天后移至PZM-3中培养5天。试验三:胚胎全程培养于分别添加了50μM,100μM和200μM维生素E的PZM-3中,以不添加维生素E的PZM-3为对照组。取得如下结果:试验一:猪体外受精胚胎和孤雌激活胚胎对照组、换液组和FBS组各组间卵裂率没有显著差异(P>0.05);FBS组囊胚率显著高于对照组和换液组(20.16% vs 10.07%、10.87%)(23.39% vs 11.45%、12.50%)(P<0.05)。试验二:猪体外受精胚胎氯化钠组卵裂率、囊胚率均显著高于对照组与蔗糖组(86.76% vs 72.46%、73.34%;20.59% vs 10.87%、11.51%)(P<0.05)。猪孤雌激活胚胎对照组与蔗糖组、氯化钠组各组间卵裂率、囊胚率差异均不显著(P>0.05)。试验三:猪体外受精胚胎对照组与添加50μM、100μM、200μM维生素E各组间卵裂率没有显著差异(P>0.05);添加100μM维生素E组囊胚率(20.16%)显著高于对照组(10.08%)(P<0.05),但与添加50μM、200μM维生素E组囊胚率(13.49%、12.21%)差异不显著(P>0.05)。猪孤雌激活胚胎对照组与添加50μM、100μM、200μM维生素E各组间卵裂率、囊胚率均没有显著差异(P>0.05)。以上结果表明,更换胚胎培养液对猪植入前体外受精胚胎和孤雌激活胚胎体外发育无影响,在更换胚胎培养液的基础上添加FBS有利于猪植入前体外受精胚胎和孤雌激活胚胎的体外发育;氯化钠调节的高渗透压可以促进猪体外受精胚胎的早期发育;添加100μM维生素E可以改善猪体外受精胚胎的体外发育体系;高渗透压和维生素E对猪孤雌激活胚胎的早期发育无影响。