论文部分内容阅读
[目的]
探讨组织块培养法分离的人脂肪源性干细胞的基本生物学特性、表面抗原特点及其向成骨细胞、成脂细胞和神经样细胞诱导分化潜能，分析人脂肪源性干细胞诱导分化的神经样细胞是否具有干细胞的特性。
[方法]
1.取健康人腹部皮下脂肪组织，组织块培养法分离出脂肪源性干细胞，进行体外培养，观察其形态特征。
2.流式细胞仪检测3代脂肪干细胞表面抗原和向神经元诱导后细胞表面抗原。
3.取第3代人脂肪干细胞，分别用成骨和成脂诱导培养液诱导其向成骨细胞和成脂肪细胞分化，冯库萨(Von Kossa)染色、茜素红染色和油红O染色定性鉴定其向成骨和成脂方向转化。
4.取第3代人脂肪干细胞，在神经细胞诱导培养液下诱导人脂肪干细胞向神经样细胞定向分化。检测神经元特异性标志物尼氏体、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和神经丝蛋白质200(NF200)表达情况，并绘制细胞增殖曲线。
[结果]
1.形态特征：原代及传代的人脂肪干细胞形态均类似成纤维细胞，生长能力旺盛。
2.表面抗原：第3代脂肪干细胞表面抗原表达：CD29、CD44、CD90、CD105表达阳性，CD34、CD45、CD106表达阴性。
3.表面抗原：向神经元诱导后细胞表面抗原表达：CD44高水平表达为86.36％，CD29、CD105阳性率下降，分别为由原来98.02％、48.85％下降为45.08％、2.66％。
4.第3代人脂肪干细胞经成脂诱导和成骨诱导培养，油红O染色、茜素红染色和Von Kossa染色阳性，从而证明其为脂肪干细胞。
5.诱导分化人脂肪干细胞向神经样细胞表型分化，检测神经细胞标志物尼氏体、神经元特异性烯醇化酶(NSE)呈阳性表达，神经丝蛋白质200(NF200)呈阴性。
[结论]
人腹部皮下脂肪组织可用组织块分离培养出脂肪干细胞，表面抗原CD29、CD44、CD90、CD105表达呈阳性，CD34、CD45、CD106表达呈阴性，能向成骨细胞、脂肪细胞和神经样细胞表型诱导分化，有望成为组织工程理想的种子细胞来源之一。