【摘 要】
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翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)在包括细胞生长、细胞周期进行以及细胞癌变等多种细胞活动中占有重要地位,具有多种生物学功能。TCTP广泛存在于多种真核生物的各种组织细胞中,但大菱鲆
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翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)在包括细胞生长、细胞周期进行以及细胞癌变等多种细胞活动中占有重要地位,具有多种生物学功能。TCTP广泛存在于多种真核生物的各种组织细胞中,但大菱鲆中还未见报道。本文采用RACE技术首次克隆得到大菱鲆TCTP基因的cDNA全长,命名为SmTCTP,并对其进行了深入研究。SmTCTP基因全长1048bp,由84个碱基的完整的5’非编码区(5’UTR)、513个碱基的开放阅读框(ORF)和451个碱基的3’非编码区(3’UTR)组成。5’UTR起始端含有一个翻译控制:mRNA所特有的5’端多聚嘧啶框(5’-TOP)。其ORF编码的蛋白质命名为SmTCTP,由170个氨基酸组成,具有两个典型的TCTP蛋白家族的特征序列,TCTP1和TCTP2,并且具有多个磷酸化位点。同源性比较表明,大菱鲆TCTP与其他已知的各种脊椎动物TCTP之间具有较高的同源性,达到58.8%~64.1%,明显大于其与各种已知无脊椎动物TCTP间的同源性。不同鱼类中TCTP的长度并不相同。大菱鲆与鲈鱼的TCTP由170个氨基酸组成,而斑马鱼与南亚野鲮的TCTP长度为171个氨基酸。进化树分析表明,SmTCTP与以上三种鱼类TCrrP以及非洲爪蟾TCTP的进化距离都比较接近。本文还通过Northern杂交分析SmTCTP mRNA在有眼侧正常黑色皮肤、有眼侧白化皮肤以及无眼侧白色皮肤的表达情况,发现其在白化皮肤组织中的表达量略高于正常皮肤。另外还发现SmTCTP只有一个转录本,此结果与南亚野鲮中一致,而与哺乳动物人和兔子不同。本文还成功构建了SmTCTP的原核表达载体pET30a-SmTCTP,通过优化条件,诱导其在大肠杆菌中高效表达,并成功纯化得到了带有组氨酸标签的融合蛋白。通过肽指纹图谱分析进行鉴定,结果表明所表达蛋白为SmTCTP的重组蛋白。以上研究为TCTP在大菱鲆中的首次报道,为进一步探索TCTP在鱼类中的生物学功能奠定了基础。
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