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目的:子宫内膜癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一,占女性生殖道恶性肿瘤的20％～30％,而且发病率有逐年增高趋势。其发生、发展是多基因、多因素共同作用的结果。近年研究发现,DNA甲基化是许多抑癌基因表达缺失的表遗传学因为,与肿瘤的发生、发展密切相关。DNA甲基化是由DNA甲基转移酶((DNAmethyltransferases,DNMTs)催化发生的,DNMT3b基因(DNA methyltransferase3b,DNMT3b)是DNMTs家族成员之一,位于20q11.2,cDNA全长4195bp,编码853个氨基酸的蛋白质。其功能主要是参与从头甲基化(de novo methylation),即在没有甲基化的DNA双链上进行甲基化的过程。研究发现,启动子CpG岛高甲基化是抑癌基因表达沉默的重要机制之一。DNMT3b的增加是引起CpG岛高甲基化的因为之一。许多研究显示,DNMT3b在多种肿瘤细胞和组织中存在不同程度的高表达,且与抑癌基因启动子高甲基化状态有明显相关性。RUNX3基因(runt-related transcriptionfactor3 gene)是Levanon等于1994年发现的一种抑癌基因,含有6个外显子,总长约为67 kb。RUNX3能调控细胞的生长发育和凋亡,对细胞的信号转导和其他生物学效应有着重要而复杂的转录调控作用,RUNX3表达缺失在人类多种恶性肿瘤的发生、发展过程中起重要作用而倍受关注。启动子区域的高甲基化是RUNX3失活的主要机制。本文旨在通过研究RUNX3、DNMT3b在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中的表达,以及与子宫内膜癌临床各病理参数之间的相关性,探讨其在子宫内膜癌发生、发展中的作用,为子宫内膜癌的早期诊断、治疗提供新靶点。
方法:
选择2006年12月-2009年9月在邢台市人民医院妇科住院手术治疗,经病理证实为不典型增生子宫内膜标本22例,子宫内膜癌标本56例,以正常子宫内膜标本20例作为对照。所有病例术前均未接受放、化疗及性激素治疗。采用免疫组织化学的方法检测三组中RUNX3、DNMT3b的表达情况,根据细胞内染色强度和阳性细胞数分级。应用统计软件SPSS13.0进行统计分析。计数资料采用(Chi-Square Test)X2检验、X2Fisher’s Exact Test检验,计量资料采用单因素方差分析(one-way ANOVA),两变量间的相关分析用Spearman等级相关分析。以a=0.05作为差异显著性水准,当P<0.05有显著性差异,P<0.01有极显著性差异。
结果:
1 RUNX3的表达:
RUNX3在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的阳性表达率分别为90.00％、63.64％、44.64％。不典型增生子宫内膜与正常子宫内膜比较,差异有显著性(x2=7.984,p<0.05)；子宫内膜癌与正常子宫内膜比较,差异有极显著性(x2=35.368,p<0.01)；子宫内膜癌与不典型增生子宫内膜比较,差异有极显著性(x2=14.904,p<0.01)。
2 DNMT3b的表达:
DNMT3b在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的阳性表达率分别为10.00％、45.46％、72.43％。不典型增生子宫内膜与正常子宫内膜比较,差异有显著性(x2=7.923,p<0.05)；子宫内膜癌与正常子宫内膜比较,差异有极显著性(x2=24.150,p<0.01)；子宫内膜癌与不典型增生子宫内膜比较,差异有显著性(x2=8.105,p<0.05)。
3相关性:
3.1 RUNX3与子宫内膜癌临床病理参数的关系
RUNX3在子宫内膜癌中的表达与手术病理分期、组织学分级密切相关(x2=11.565,X2=10.636,p<0.01,p<0.01),与病理分型、淋巴结转移无相关性(x2=0.048,x2=0.348,P>0.05,P>0.05)。
3.2 DNMT3b与子宫内膜癌临床病理参数的关系
DNMT3b在子宫内膜癌中的表达与手术病理分期、组织学分级密切相关(x2=7.798,x2=12.337,p<0.05,p<0.01),与病理分型、淋巴结转移无相关性(x2=0.351,x2=0.075,p>0.05,p>0.05)。
3.3 RUNX3与DM3b相关性
应用Spearman等级相关分析发现,在子宫内膜癌组织中RUNX3与DNMT3b表达呈负相关(r=-0.705,P<0.01)。
结论:
1 RUNX3在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达呈阶梯下降趋势。DNMT3b在正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的表达呈依次升高趋势。它们的异常表达与子宫内膜癌的发生、发展有关。联合检测两者可能有助于子宫内膜癌的早期诊断。
2 RUNX3的表达缺失和DNMT3b的表达增高均与子宫内膜癌的病理分期和组织分化程度有关,随着子宫内膜癌病理分期增高、组织分化程度越低,DNMT3b的表达水平随之增加,RUNX3的表达缺失越明显。说明RUNX3和DNMT3b与子宫内膜癌的浸润、扩散有关。提示它们可以作为预测子宫内膜癌侵袭性及预后的有效监测指标。
3实验表明RUNX3、DNMT3b在子宫内膜癌中的表达呈负相关,提示RUNX3作为DNMT3b的催化靶基因发生了甲基化而失活,两者在子宫内膜癌的发生、发展中有协同作用。