TAGLN对五指山小型猪骨髓间充质干细胞迁移能力的影响

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间充质干细胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是多功能成体干细胞,可以很容易从骨髓中分离,并在体外扩增。对人体自我修复与组织再生很重要。作为成体干细胞家族中的种子细胞是最近医学领域,细胞工程领域研究的重点和前沿。骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)是目前整个生命科学领域和细胞工程领域应用最多的一种MSCs。BMMSCs的低免疫原性在组织再生医学和损伤修复能力方面起着关键的作用。它不仅有强大的分化潜能和高度的可塑性,而且在骨髓中合成分泌多种细胞因子,在通过细胞之间的相互作用下为造血干细胞的分裂、增殖与分化提供了良好的微环境。但是,关于对影响骨髓间充质干细胞(BMMSCs)迁移能力方面的研究,尤其是在影响五指山小型猪(WZSP)BMMSCs迁移能力的研究还是很有限的。为此,我们对影响WZSPBMMSCs的迁移因子进行深入的探讨。在这项研究中,研究了胶转蛋白(TAGLN)调控WZSP BMMSCs的体外迁移能力。采用设计构建TAGLN的shRNA真核表达载体,并转染BMMSCs,进一步研究此表达载体对目的基因TAGLN的干扰效果。为将来MSCs更好的应用于组织损伤修复,器官重建,和一些临床治疗等方面提供实验理论依据。方法是以TAGLN为靶基因,以构建好的TAGLN的shRNA真核表达载体。提取无内毒质粒通过电穿孔法将shRNA转染BMMSCs,用RT-PCR检测转染后BMMSCs中TAGLN基因的表达水平,用western blot检测转染后BMMSCs中蛋白的表达水平。用划痕实验和Transwell体外迁移模型等实验技术检测细胞迁移的情况。从而探究TAGLN对MSCs迁移能力的影响。RT-PCR实验显示感染TAGLN shRNA真核表达载体的BMMSCs的表达量较感染空载体细胞明显降低。Western blot检测实验显示感染TAGLN shRNA真核表达载体的BMMSCs的蛋白表达量明显低于感染空载体的细胞。划痕实验和Transwell体外迁移模型实验证明,感染TAGLN shRNA真核表达载体的BMMSCs迁移率明显低于非特异转染组。以上可以证明TAGLN可以调控MSCs的迁移能力。TAGLN与WZSP MSCs的迁移存在正相关,并获得了经TAGLN shRNA真核表达载体干扰的稳定细胞株。本研究首次对TAGLN在WZSP MSCs迁移上的影响进行研究,为更进一步深入的研究TAGLN影响MSCs迁移方面的相关机制奠定基础。结果表明, TAGLN特定的shRNA可以干扰BMMSCs中的TAGLN基因的表达,并且发现五指山小型猪的BMMSCs经过TAGLN基因干扰,其迁移能力显著降低。总之,Transgelin可以调控五指山小型猪BMMSCs的迁移能力,与此同时,也为将MSCs更好地应用于组织损伤修复、器官移植等方面提供实验基础和理论依据。
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