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分离、诱变与筛选了绿僵菌素生产菌株，比较研究了培养基、温度、以及繁殖世代对高产菌株菌丝生长、产孢能力和毒素生产的影响，探索了摇瓶发酵生产绿僵菌素及分离制备绿僵菌素的优化条件，并且开展了绿僵菌素对斜纹夜蛾、烟粉虱及蛴螬的毒力测定工作，同时，研究了绿僵菌素对血细胞的影响。主要结果如下：
1．分离、诱变和筛选了绿僵菌素生产菌株，结果表明：(1)分离了79个野生菌株，其中来自僵虫54个，取自土壤25个，都是绿僵菌属(Metarhizium)。测定了86个菌株的绿僵菌素产量，其绿僵菌素A、B的平均产量分别为14．9±2．30和3．74-0．57＃g／mL。其中产量最高的菌株是MaQl0，绿僵菌素A和B产量分别达到106．8±9．41和29．5±2．63＃g／mL。(2)以MaQl0作为出发菌株，利用紫外线诱变其分生孢子和原生质体，分别筛选了40个诱变株。分生孢子诱变株的绿僵菌素A和B的平均产量分别为45．05±7．77和10．83±1．05／ag／mL，产量最高的是UC08菌株，绿僵菌素A产量达到158．29±3．85＃g／mL，比出发菌株增产48．21％。原生质体诱变株的绿僵菌素A和B平均产量分别为68．78±6．07和11．77±1．33＃g／mL，产量最高的是UP24菌株，达到139．38±24．09和36．14±6．66／tg／mL，比出发菌株分别增产30．51％和22．52％。原生质体诱变比分生孢子诱变更加容易获得正突变菌株。
2．比较研究了MaQl0、UC08和UP24三菌株生物学与毒素生产性状，发现：(1)在相同培养基和相同温度条件下，三菌株的菌丝生长速度及孢子产量没有显著差异。但同一菌株如果培养基或温度不同，生长和产孢差异明显，PDA培养基最适于菌丝生长，SDAY培养基最适于孢子产生；液体培养基中适当加入蛋白胨能显著促进生物量形成；25-30~C最适宜菌丝生长和孢子形成，低于15℃或高于35℃时，菌丝生长速度和产孢量显著降低。(2)随着繁殖世代数的增加，三菌株的菌丝生长稳定，但产孢量和绿僵菌素产量有不同程度变化。从F2-F20代，UC08和UP24菌株的产孢量显著性下降，但MaQl0的产孢量下降不显著；UC08菌株的绿僵菌素A产量显著下降，UP24和MaQl0菌株较为稳定，其它绿僵菌素产量变化不显著。(3)三个菌株产生的绿僵菌素种类基本相同，主要是绿僵菌素A、B、C、E和A2五种。
3．采用响应面分析法(RSM)研究了MaQl0菌株摇瓶生产绿僵菌素及超声波强化萃取绿僵菌素的的最佳条件，并且探讨了绿僵菌素的减压层析分离方法。(1)生产绿僵菌素A的最佳条件是：接种量8％、pH值9．0、温度27~0和转速240r／min；生产绿僵菌素B的最佳条件是：或者接种量8％、pH值9．0、温度25℃和220r／min的转速；最佳发酵时间是8d，绿僵菌素A和B产量分别达到250和45pg／mL，分别增产140％和50％以上。(2)在40kHz超声波协同作用下，绿僵菌素的最佳萃取条件为：pH4．0，溶剂／发酵液=1／1(v／v)，以及萃取时间为60min，预测的绿僵菌素A和B萃取率分别为93．10％和97．45％，实测值分别为93．58％和96．94％。(3)减压柱层析分离绿僵菌素A与B的最佳洗脱剂为正已烷／丙酮=100／0-30／70梯度，绿僵菌素B主要在90／10部分收集，绿僵菌素A主要在70／30-50／50部分收集。
4．测定了绿僵菌素对斜纹夜蛾Spodopteralitura(Fabricius)、烟粉虱BemisiatabaciGennadius和蛴螬的生物活性，结果表明：(1)绿僵菌素对斜纹夜蛾具有触杀活性，绿僵菌素A、B和E的120h半致死浓度LC50分别为161．54、209．80和97．19mg/L；当处理浓度为300mg/L时，A、B和E的致死中时间LTso分别为：38．60、54．86和22．57h。绿僵菌素对斜纹夜蛾具有拒食活性，当处理浓度100mg几时，绿僵菌素A、B或E的选择性拒食指数分别为91．24、65．68和69．22，非选择性拒食指数分别为70．29、52．63和52．42。绿僵菌素能够增强爪哇拟青霉Paecilomycesjavanicus(Friedrichs&Bally)Brown&SmithPi01菌株对斜纹夜蛾的致病能力，在粗毒素协同作用下，拟青霉的半致死浓度降低，半致死时间缩短。(2)绿僵菌素对烟粉虱有较强的触杀作用，绿僵菌素A对2、3和4龄粉虱的96hLCso值分别为：71．50、152．00和251．95mg几，绿僵菌素B分别为85．76、131．75和245．98mg／L。当处理浓度为150mg／L时，绿僵菌素A、B对2龄烟粉虱的LTso分别为25．99和27．31h。绿僵菌素没有杀卵作用，也没有产卵忌避作用。(3)绿僵菌素A和B对大等鳃金龟ExolonthaserrnlataGyllenhall1龄幼虫具有触杀活性，其120h的LC50分别为75．98和90．03mg&。在浓度为300mg&时，绿僵菌素A和B的LT50分别为13．94和10．49h。绿僵菌素A和B对卵圆齿爪鳃金龟HolotrichiaovataChang的触杀活性，96h的LC50分别为64．68和79．27mg&，当处理浓度为300mg&时，LT50分别是14．98和10．38h。
5．绿僵菌素对血细胞的影响，研究结果表明：(1)绿僵菌素对血细胞有毒，绿僵菌素A对粒血细胞和浆血细胞的LCso值分别为171．60和175．83,ug／mL，而绿僵菌素B分别为118．12和156．32／tg／mL。(2)通过激光扫描共聚焦显微技术，首次发现，绿僵菌素能引起血细胞内游离钙离子浓度立即增加。当绿僵菌素A处理浓度为345＃mol／L时，粒血细胞与浆血细胞内的荧光增强率分别达到32．95％和30．25％，当绿僵菌素B以125／tmol／L处理时，分别为13．81％和11．81％。并且，这种胞内钙离子的增加是由于胞外(培养液)钙离子内流所引起。同时，钙离子通道阻断剂2-APB和U73122，不管是单独作用还是联合作用，都不能抑制这种钙离子内流现象，实验暗示绿僵菌素不是作用于钙池调控的钙离子通道(SOC)。(3)首次发现，绿僵菌素能引起血细胞内游离氢离子的立即减少，当绿僵菌素A以345pmol／L处理时，其引起的浆血细胞和粒血细胞内荧光减弱幅度分别为8．19％和6．70％，当用20pmol／L的绿僵菌素B处理时，分别减弱20．48％和50．08％。空泡型质子泵(V-ATPase)阻断剂BafilomycinA1不能抑制这种胞内氢离子浓度减少现象。