【摘 要】
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目的:该研究旨在体外建立类转录激活因子效应物核酸酶(简称TALEN)介导的E-cadherin(简称E-cad)、Bmi-1基因联合干预鼻咽癌细胞CNE-2转移的技术,为鼻咽癌的基因治疗提供实验基
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目的:该研究旨在体外建立类转录激活因子效应物核酸酶(简称TALEN)介导的E-cadherin(简称E-cad)、Bmi-1基因联合干预鼻咽癌细胞CNE-2转移的技术,为鼻咽癌的基因治疗提供实验基础。方法:在本课题组前期构建的通用多位点基因打靶载体pUC-DS1-DS2的基础上,通过In-fusion技术分别插入E-cad表达元件、Bmi-1 shRNA表达元件,构建多位点基因打靶载体pUC-DS1-CMVE-cad-2A-Neo-DS2、pUC-DS1-Bmi-1 shRN A-Zeo-DS2,将E-cad基因打靶载体、Bmi-1 shRNA基因打靶载体分别或共同与本课题组前期构建的TALEN转染鼻咽癌CNE-2细胞株,PCR检测靶基因的整合情况,Western Blot检测E-cad和Bmi-1蛋白表达以及上皮间质转化(EMT)标志蛋白(Vimentin、α-1-Catenin、Fibronectin)的表达情况,Transwell小室实验、CCK-8、流式细胞术检测E-cad、Bmi-1被干预后对鼻咽癌细胞株CNE-2生物学行为的影响。结果:E-cad、Bmi-1 shRNA表达元件成功整合到CNE-2细胞的基因组中;E-cad的蛋白表达水平明显上调,Bmi-1的蛋白表达水平明显下调;与对照组相比,单基因或双基因转染组的细胞迁移和侵袭能力均明显下降,同时EMT标志蛋白Vimentin、Fibronectin的蛋白表达明显下调,α-1-Catenin的蛋白表达明显上调,且双基因干预比单基因干预更能显著抑制鼻咽癌细胞CNE-2体外迁移能力和EMT进程。结论:TALEN和多位点基因打靶技术联合干预鼻咽癌转移的体外研究,将为人类癌症的基因治疗和动物基因组编辑建立实验基础。
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