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SLE是一种自身免疫性疾病,患者血清中可检出多种自身抗体,其中最重要的是抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体,虽然抗ds-DNA抗体对于确诊SLE及判断狼疮的活动性参考价值较大,但SLE病人经治疗(如使用激素),抗ds-DNA抗体的阳性率明显降低,而抗Sm抗体虽然与SLE病情活动与否无关,但治疗后抗Sm抗体仍持续阳性,故抗Sm抗体又称为回顾性抗体,被认为是SLE的标志性抗体,并已成为美国风湿病协会(American College of Rheumatology,ARA)1997年修订的诊断标准之一。在Sm抗原中能与抗Sm抗体发生反应的是Sm B/Bˊ和Sm D,而Sm E、F、G及N几乎不与抗Sm抗体起反应。抗Sm B/Bˊ抗体与其它抗RNP抗体存在交叉反应,降低了抗Sm B/Bˊ抗体对SLE诊断的特异性,故抗Sm D抗体被认为是SLE的标志性抗体,而Sm D抗原中最重要的免疫活性蛋白是Sm D1,因此抗Sm D1抗体的检测对SLE的诊断具有重要的作用。本研究利用分子克隆技术,以人白血病HL-60细胞的cDNA文库为模板,PCR扩增人Sm D1基因编码序列,并将其插入原核表达载体pGEX-5T,构建原核重组表达载体pGEX-5T-Sm D1,在E.coli BL21(DE3 plysS+)中诱导Sm D1的表达。通过12% SDS-PAGE电泳、蛋白免疫印迹等鉴定表达产物。结果表明,重组Sm D1在E.coli BL21(DE3 plysS+)中获得较高表达,并具有较高的抗原活性。所得的包涵体经变性、复性后用GST层析柱进行初步分离纯化,得到了纯度较高的重组蛋白,为特异性抗Sm D1抗体的检测奠定了基础。由于原核表达产物为包涵体,在纯化方面较为复杂,故本研究尝试在真核表达系统中进行表达。同样以人白血病HL-60细胞的cDNA文库为模板,PCR扩增人Sm D1基因编码序列,并将其插入真核表达载体pPIC9K,构建真核重组表达载体pPIC9K-Sm D1,在毕赤酵母SMD1168中诱导Sm D1的分泌型表达。经硫酸胺浓缩沉淀,通过Tricine-SDS-PAGE电泳、蛋白免疫印迹等鉴定表达产物。结果表明,重组Sm D1在毕赤酵母SMD1168中同样获得较高表达。我们应用初步纯化的真核产物建立DIGFA法检测抗Sm D1抗体,敏感性与IB法相同,特异性稍差,但本法具有简便、快速和经济等优点,由于检测标本有限,该法在临床上的应用价值有待进一步研究。总之,本实验室通过分子克隆技术初步获得了人Sm D1抗原,并对其抗原性进行了一定的研究,并建立了DIGFA法检测抗Sm D1抗体。