前景和目的：宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率在女性恶性肿瘤中居第二位,仅次于乳腺癌。在已建立了筛查制度的发达国家和一些发展中国家的流行病学资料显示,宫颈浸润癌的发病率和死亡率已经大幅度下降。近年来一些国家和地区报道,宫颈癌的发病率和死亡率大致稳定,但有局部增长的趋势,特别是宫颈癌的年轻病例有所增加,宫颈癌的预防和早期诊断一直是医学研究的热点。由于12-15％未经治疗的中重度宫颈上皮内瘤变能进一步发展为原位癌或浸润癌,目前临床仅仅根据形态学改变无法判定究竟哪种癌前病变可能消退,进展或持续存在,因此,如果使用某种特异的分子生物学指标能够辅助判定宫颈癌前病变的转归,对于临床治疗及预后判断将有重要的指导价值。流行病学资料结合实验室的的证据已经确定HPV感染是宫颈癌发生的必要条件,但一系列的证据表明单一的HPV感染并不足以导致宫颈细胞的恶性转化,在HPV感染的患者中只有极少部分宫颈病变会发展为宫颈浸润癌,因此其他导致基因突变的事件,诸如癌基因活化或抑癌基因失活可能协同参与HPV感染在宫颈癌发生发展中的作用。 p16基因又称多肿瘤抑制基因(MTS1),它是直接作用于细胞周期的抑癌基因。研究证实P16基因失活与肿瘤的发生、发展有着密切的关系。宫颈癌中P16基因主要失活形式是启动子甲基化；DNA甲基化修饰是基因组表观遗传调控中主要的方式,越来越多的研究显示人类肿瘤的发生、发展与DNA甲基化的异常有关,并且早在肿瘤临床确诊之前就可检测出特异基因的甲基化异常现象。因此特异基因的甲基化可能可以作为癌症早期诊断的分子标记物、治疗的靶点和判断预后手段。有关宫颈癌中P16基因甲基化与HPV感染的关系,有不同报道,有学者认为两者的作用是相互独立的,另有学者认为两者有协同作用,参与宫颈癌的发生。本实验通过检测不同宫颈病变组织中p16基因启动子甲基化的情况,比较正常宫颈、CIN及宫颈癌组织中的p16基因启动子甲基化表达差异,了解其在宫颈癌发生过程中的作用,探讨p16基因启动子甲基化作为预测宫颈癌发生的分子生物学标志物的可能性：同时检测宫颈癌组织中HPV感染型别,探讨二者在宫颈癌发生中的相关性。 材料与方法： 1、通过甲基化特异性PCR(MSP)方法检测并比较正常宫颈组织(n=10)、CIN I(n=30)、CINII-Ⅲ(n=30)及宫颈癌组织(n=40)中P16基因启动子甲基化情况： 2、分析P16基因启动子甲基化与宫颈癌临床-病理因素间的关系； 3、用导流杂交基因芯片技术(HybriMax)测定CIN I、CIN II-Ⅲ及宫颈癌组织中HPV分型并分析P16基因肩动子甲基化与HPV感染的关系。 4、统计学方法：采用x2检验、Fisher精确检验各相关分析进行统计分析。 结果： 在MSP方法检测不同宫颈病变组织中p16基因启动子甲基化情况及其CIN、宫颈癌组织中HPV分型的基础上,本研究发现： 1.正常宫颈组织、CIN I、CIN II-Ⅲ及宫颈癌组织中P16基因肩动子甲基化的发生率分别为0、3.3％、23.3％和25％,呈升高趋势(p=0.003),ICC及CINII-Ⅲ均高于CINI,差异有显著性(P<0.05),ICC与CINII-Ⅲ间比较无显著性差异(p>0.05)。 2.P16基因启动子甲基化发生率与宫颈癌患者的年龄、组织学分级、病理类型显著相关,40岁以下,低分化、鳞癌多见(P<0.05),；与临床分期及淋巴结转移无明显相关性(P>0.05)。 3.正常宫颈组织、CIN I、CINII-Ⅲ及宫颈癌组织中高危型HPV感染率分别为0、36.7％、80％和92.5％,HPV16和/或HPV18亚型占HR-HPV的50％,是宫颈癌及癌前病变中最常见的感染亚型。在HPV16/18感染阳性的宫颈病变中P16基因启动子甲基化发生率为25％、在其它HR-HPV感染阳性的发生率为16.7％,在HPV感染阴性或LR-HPV感染阳性的发生率为10.7％,各组间比较无显著性差别(P>0.05)。 结论： P16基因启动子甲基化有可能成为预测宫颈癌前病变级别进展的生物学指标,且有可能促使宫颈癌恶性进展。P16基因商团动子甲基化发生率与HR-HPV感染无明显相关,提示P16基因肩动子甲基化发生可能是独立于HPV感染的分子事件。