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铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是临床上最常见的引起感染的革兰氏阴性条件致病菌,也是一种典型的耐药菌。磷酸化是一种重要的蛋白质翻译后修饰,是调节和控制蛋白质功能最普遍,也是最重要的机制。近年来有研究表明Ser/Thr蛋白激酶及其引起的磷酸化修饰与细菌的毒力及耐药性有关。本课题拟揭示P.aeruginosa的Ser/Thr蛋白激酶PpkA对其毒力及耐药的调控作用。通过比较野生型菌株P.aeruginosa PAO1和ppkA基因缺陷菌株△ppkA对Hela细胞的侵袭作用、植物的毒力、绿脓菌素分泌、氧化应激和高渗环境的抵抗及生物被膜产量等方面的差异来研究PpkA对P.aeruginosa毒力的调控作用,实验结果表明PpkA可增强P.aeruginosa毒力。为探讨PpkA在耐药中的作用,首先用1/2 MIC的庆大霉素诱导PAO1,获得耐药菌PAO1-R,经Western Blot分析,发现PAO1-R与PAO1相比其全菌蛋白的Ser、Thr磷酸化水平和另两种Ser/Thr蛋白激酶Stk1、PA1782表达量均上调,这提示PpkA与该菌的耐药性相关。对多种抗生素的MIC分析结果却显示PAO1和△ppkA的MIC均相同,但Western Blot结果表明PAO1膜蛋白Ser、Thr蛋白磷酸化水平均明显高于△ppkA;同时,与PAO1相比,Stk1和PA1782在△ppkA中的表达量均上调;在头孢他啶、庆大霉素次抑菌浓度(1/4MIC、1/2MIC)的诱导下,△ppkA生物被膜的产量高于PAO1。因而认为PpkA参与调控P.aeruginosa耐药性。本研究揭示了PpkA对P.aeruginosa毒力、耐药性的调控作用,为Ser/Thr磷酸化对P.aeruginosa毒力和耐药调控作用的深入研究提供理论基础,也为治疗P.aeruginosa感染提供新的思路。