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背景及目的：腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease, CMT),又称遗传性运动感觉性神经病(Hereditary motorsensory neuropathy, HMSN),是一组最常见周围性基因遗传病。CMT1型约占CMT总数的50%,其中以PMP22基因大片段串联重复突变所致CMT1A最常见,占CMT1型的70%。CMT2型主要遗传方式为常染色体显性遗传,占CMT的20%-40%左右,其中最常见类型为MFN2基因突变导致的CMT2A型,约占CMT2型的8%-33.3%。CMTX型在所有CMT型患者中所占比例约为10%～15%,CMTX中最常见的为显性遗传CMTX,即CMTX1型,由CX32基因突变导致,占了CMTX型中近90%。至今CMT己50个位点及30多个基因被定位,研究发现CMT并不具有很好的基因-表型相关性,即使是同一家系内同一基因突变导致的不同患者临床表现均不完全一致。在CMT疾病诊断方面,系统、方便有效的基因诊断流程的建立非常必要。本课题针对CMT最常见致病基因PMP22、CX32、MFN2展开突变筛查工作,同时构建CX32(c.65G>A)质粒验证点突变对CX32功能表达的影响。方法：1.利用扩增3.6kb大小包含1.7kb交换热点区域的PMP22基因重复特异REP连接片段的PCR--双酶切方法检测70例先证者2.取34例通过等位基因特异性PCR及实时荧光定量PCR检测排除PMP22大片段重复突变、无男传男遗传方式的先证者行CX32基因PCR-直接测序筛查检测。3.取23例临床表现、电生理或病理活检结果符合CMT2型诊断标准的患者行MFN2基因PCR-直接测序筛查检测。4.构建CX32(c.65G>A)的pEGFP-N1-wtCX32及pEGFP-N1-mtCX32质粒,转染入Hela细胞初步研究CX32功能表达。结果：1.筛查出1例PMP22大片段重复突变阳性家系,1例PMP22大片段缺失突变家系。2.筛查出6个CMT家系中发现5个CX32基因突变：c.37G>A、 c.65G>A、c.246C>G、c.256A>G和c.533A>G。其中c.246C>G和c.533A>G暂未见报道。CMT患者中CX32基因突变率为9%。3.筛查出MFN2基因两杂合突变位点c.280C>T及c.395G>A。其中c.395G>A暂未见报道。CMT2型患者中MFN2基因突变率为8%。4.成功构建CX32(c.65G>A)的pEGFP-N1-wtCX32及pEGFP-N1-mtCX32质粒,并瞬时转染入Hela细胞。结论：1.PMP22基因重复特异REP连接片段的PCR-双酶切方法作为一线筛查PMP22基因大片段突变有待考究。2.CX32及MFN2基因可通过PCR-直接测序法行基因突变筛查,本研究筛查此两基因突变率与国外报道一致。其中CX32基因c.246C>G和c.533A>G及MFN2基因c.395G>A之前均未见报道。3.初步验证CX32(c.65G>A)可影响CX32功能表达,但下一步稳转株构建、其他突变位点(特别是c.246C>G和c.533A>G)克隆及进一步功能研究仍需努力。