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旋毛虫是一种人畜共患的寄生虫,可感染包括人在内的150多种哺乳动物,能引起人及动物一系列临床症状,严重者可导致死亡。自1835年人类首次发现旋毛虫以来,该病不但未能得到完全有效的控制,受害范围反而扩大了,成为一种全球性的疾病,严重危害着人类健康,已给畜牧业及食品工业造成重大的经济损失。所以,建立一种快速、简单、能够广泛应用的方法势在必行。据研究,旋毛虫肌幼虫的排泄-分泌抗原具有较高的特异性和敏感性,可用于旋毛虫病的检测。本研究旨在应用基因工程的方法,通过PCR法扩增出旋毛虫肌幼虫的P49基因,在体外表达获得可用于免疫诊断的P49抗原。 以旋毛虫总RNA为模板,通过设计合成引物,以RT-PCR法扩增出旋毛虫肌幼虫分泌性蛋白P49序列,将其克隆入pGEM-T载体并进行了序列测定。结果表明,扩增片段大小约为960 bp,与Genbank中已报道过的P49序列具有高度同源性。成功构建了重组质粒pET-P49,并进行了P49基因在原核中的高效表达研究。结果,表达产物分子量约为38 kDa,占菌体总蛋白的7%左右;SDS-PAGE及Western blot分析表明,该表达蛋白能与感染旋毛虫猪阳性血清发生特异性免疫反应,具有较强的免疫学活性。P49抗原在大肠杆菌中的成功表达,为旋毛虫病的快速检测及免疫预防的深入研究奠定了基础。