本研究从皮革厂、畜肉市场和屠宰场等处采样，分离得到49株具有明胶水解活性的微生物。菌株Col-C的培养液能在48h内对犊牛皮有明显消化作用，菌株Col-J则能完全消化。经形态学观察、生理生化培养和16SrDNA序列分析，鉴定菌株Col-C为粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescen)，菌株Col-J为短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)。以Ⅲ型酸性胶原蛋白为底物，菌株Col-C和菌株Col-J的胶原蛋白酶活性分别为21.19U/mL和35.97U/mL。菌株Col-J培养液的活性凝胶电泳实验表明：该菌至少产生了3种具有胶原蛋白酶活性的同工酶。 以短小芽孢杆菌Col-J为材料，进行了胶原蛋白酶的分离纯化。发酵液离心去菌体，上清分别采用30％饱和度和75％饱和度的硫酸铵分级沉淀，沉淀溶解后，透析脱盐、浓缩。将样品过SephadexG-100分子筛层析柱，收集活性峰S1。然后用过SepharoseFastFlow阴离子交换层析柱，收集活性峰Q3。SDS-PAGE检测表明：得到的电泳纯胶原蛋白酶，分子量约为58.64kD。结果表明：本实验对胶原蛋白酶的纯化倍数为31.53，回收率为7.00％。 对纯化后的胶原蛋白酶进行酶学性质研究。结果表明：该酶的最适反应温度为45℃，最适反应pH值为7.5。具有较强的耐热性，经30℃-65℃处理5min后仍能相对稳定，可保持在最高酶活的60％以上。经pH6-pH8.5的缓冲液处理30min后相对稳定，能保持在最高酶活的60％以上。离子影响实验表明：50mmol/L的Li+、K+、Zn2+、Mg2+、Ca2+和Ba2+对胶原蛋白酶具有一定的激活作用，而50mmol/L的Na+、Mn2+、Fe3+和pb2+，以及0.01mmol/L的EDTA、EGTA和巯基乙醇则能抑制胶原蛋白酶的酶活。其中，Ca2+对酶的激活作用最强，相对酶活达到127％；而EGTA对酶的抑制作用最为强烈，相对酶活仅为10.1％。底物特异性实验表明，该酶对Ⅲ型酸性胶原蛋白具有较高的专一性。在pH7.5，45℃条件下，该胶原蛋白酶对酸性可溶胶原蛋白Ⅲ的米氏常数Km为0.79mg/mL，最大反应速度Vmax为0.1295mg/(min·mL)。与已有报道的胶原蛋白酶性质比较表明：从短小芽孢杆菌Col-J分离纯化的该酶是一种新的胶原蛋白酶。