【摘 要】
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精子发生是一个从二倍体的精原干细胞分化为单倍体精子的周期性过程。这个过程受到高度的调控，尤其是在转录后水平。MicroRNA(miRNA)是一类长度约22个核苷酸的单链非编码核糖
【出 处】
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中国科学院研究生院 中国科学院大学
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精子发生是一个从二倍体的精原干细胞分化为单倍体精子的周期性过程。这个过程受到高度的调控，尤其是在转录后水平。MicroRNA(miRNA)是一类长度约22个核苷酸的单链非编码核糖核酸，参与很多重要的生物学过程的调控，比如，增殖、分化、凋亡等。越来越多的证据表明miRNA参与精子发生的调控，但是对于miRNA在精子发生过程中的功能以及作用机制的研究仍然为数不多。 本研究通过高通量测序发现，一些miRNA在小鼠睾丸中高度表达，其中miR-202-3p在小鼠睾丸中呈现组织特异性表达，尤其在A型精原细胞的表达量远远高于在粗线期精母细胞和圆形精子细胞。利用实时定量PCR对小鼠不同组织和各阶段生殖细胞中miR-202-3p的表达进行了检测，证实了miR-202-3p的这种表达模式。 此外，在体外培养的精原干细胞中转染miR-202-3p的抑制物，可以导致SSCs的数量显著减少，同时实时定量PCR结果显示SSCs分化相关的标记基因Dazl、Stra8和Sycp3的表达量显著升高。证明了miR-202-3p对于SSCs的自我更新和维持是非常重要的。 采用生物信息学软件TargetScan、PicTar、MiRanda预测可能受miR-202-3p调控的靶基因，将含有预测的结合位点的候选靶基因的3’UTR连入荧光素酶报告载体中，进而通过荧光素酶检测系统筛选候选的靶基因。我们发现miR-202-3p对pMIR-REPORT-Cpeb33’UTR荧光素酶活性的抑制作用最强。将预测的结合位点突变后，miR-202-3p对荧光素酶的活性的抑制作用没有野生型显著，表明miR-202-3p是通过与预测结合位点结合而发挥靶向调节Cpeb3基因的作用。 以上结果表明，miR-202-3p在精子发生过程中对精原干细胞维持和自我更新有重要作用。miR-202-3p的直接靶基因是Cpeb3。
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