【摘 要】
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猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCV1)无致病性,广泛存在于猪群中;猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起猪断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weanin
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猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCV1)无致病性,广泛存在于猪群中;猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起猪断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)等相关疾病的重要病原。 猪圆环病毒ORF2基因编码病毒的主要结构蛋白Cap蛋白,该蛋白具有良好免疫原性。PCV1和PCV2 ORF2基因序列的核苷酸同源性为67%。两种血清型的Cap蛋白上存在共同的抗原决定簇,但两者没有抗原交叉性,因而是区分PCV1和PCV2的重要蛋白。 本研究利用PCR技术,分别从PCV1、PCV2毒株中扩增PCV1全基因组及PCV2 ORF2基因,并克隆入转移载体中,根据蓝白筛选及限制性酶酶切分析得到分别含有PCV1和PCV2 ORF2基因的重组质粒,对重组质粒中插入的片段进行序列测定,结果表明插入的序列与公开发表的序列完全一致。将PCV1全基因组克隆入pBluescript SK(pSK)载体,PCR扩增缺失PCV1 ORF2的基因组pSK-PCV1△ORF2,将该基因组与PCV2 ORF2基因连接,得到pSK-PCV1△ORF2-PCV2-ORF2(即pSK-sPCV1-2)重组质粒。用Kpn Ⅰ对pSK-sPCV1-2质粒进行部分酶切,获得含有PCV1△ORF2-PCV2-ORF2(即嵌合型PCV1-2全基因组)全基因组单拷贝的线性载体,去磷酸化后与另一段PCV1△ORF2-PCV2-ORF2全基因拷贝连接,获得嵌合型感染性PCV1-2DNA克隆(即pSK-dPCV1-2)。对该重组质粒进行酶切分析和核苷酸序列分析,结果表明插入的片段与预期一致。用脂质体法将构建的重组质粒转染Dulac细胞(无PCV1污染)、PK-15细胞(PCV1污染),应用PCR对转染细胞中PCV2 ORF2基因检测,经5次传代,在细胞中均能检测出PCV2 ORF2基因;间接免疫荧光试验(IFA)观察,发现转染后的细胞
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