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目的: 利用全基因组甲基化芯片筛选出产妇和新生儿甲基化水平密切相关的蛋白C(protein C,PROC)基因,结合大气污染物暴露资料,探索孕期大气污染物暴露及PROC基因交互作用对DNA甲基化和新生儿出生特征的影响,为胎源性疾病的预防及孕期环境干预提供线索。 对象与方法: 1.调查对象选择 在知情同意的前提下,选择2010年1月至2012年1月在郑州市侯寨卫生院分娩的健康产妇及新生儿共582对作为调查对象,进行问卷调查并采集新生儿脐带血和产妇静脉血。 2.大气污染物浓度测定 郑州大学环境科学研究院和郑州市环境保护监测中心站联合提供当地大气污染物浓度数据。 3.产妇及新生儿出生特征测量 身高体重测量仪测量产妇身高、分娩前体重、分娩后体重;新生儿出生体重、身长和头围分别用电子秤、卧式身长计和皮尺测量。 4.PROC基因启动子区甲基化水平及rs1799809基因多态性的测定 利用北京百泰克公司DNA提取试剂盒提取基因组DNA;PROC基因启动子区甲基化水平采用定量甲基化特异PCR(quantitative methylation specific-polymerase chain reaction,QMS-PCR)方法进行测定。TaqMan探针法分析PROC rs1799809位点多态性。 5.数据处理 采用 Epidata3.1软件建立数据库;数据分析采用 SPSS21.0。主要统计分析方法有:配对t检验、χ2检验、岭回归、多重线性回归。检验水准α=0.05。 结果 1.产妇及新生儿PROC基因启动子区甲基化水平相关性分析。 新生儿脐血PROC基因启动子区甲基化水平高于产妇外周血甲基化水平(t=6.305,P<0.001),且与产妇PROC基因启动子区甲基化水平呈正相关(r=0.154,P<0.001)。 2.孕期大气污染物暴露、PROC rs1799809基因多态性及其交互作用对PROC基因启动子区甲基化水平的影响。 (1)产妇PROC基因启动子区甲基化水平与孕期平均大气污染物暴露均无关(P均>0.05)。调整产妇PROC基因启动子区甲基化水平后,新生儿PROC基因启动子区甲基化水平与孕期NO2暴露呈负相关(β=-0.162,P<0.05)。 (2)携带PROC基因rs1799809 AA/AG基因型的新生儿PROC基因启动子区甲基化水平分别高于携带相同基因型产妇外周血甲基化水平(t=4.524,P<0.001和t=3.801,P<0.001) (3)产妇孕期相同NO2暴露水平下,携带GG基因型新生儿PROC基因启动子区甲基化水平低于携带AA基因型新生儿(β=-1.414,P=0.043)。 3.孕期大气污染物暴露、PROCrs1799809基因多态性及其交互作用对新生儿出生特征的影响。 (1)新生儿出生体重与产妇年龄、孕前 BMI、孕期体重增加呈正相关(β=10.086,P=0.012;β=25.688,P=0.001和β=22.725,P<0.001)。新生儿出生头围与产妇孕期体重增加呈正相关(β=0.026,P<0.001)。新生儿出生特征与产妇及新生儿PROC基因启动子区甲基化水平均无关(P均>0.05)。 (2)新生儿出生体重分别与产妇孕期平均SO2、NO2暴露相关(β=-0.314, P<0.001和β=0.282,P<0.001);新生儿出生身长分别与产妇孕期平均SO2、NO2暴露相关(β=-0.324,P<0.001和β=0.217,P<0.001)。 (3)携带PROC rs1799809不同基因型的新生儿出生特征差异均无统计学意义(P均>0.05)。产妇孕期相同PM10暴露水平下,携带AG/AG+GG基因型新生儿出生体重高于携带 AA基因型新生儿(β=21.222,P=0.006和β=19.036,P=0.007)。 结论: 1.产妇外周血PROC基因启动子区甲基化水平可影响新生儿脐血PROC基因启动子区甲基化水平。 2.产妇孕期NO2暴露可影响新生儿PROC基因启动子区甲基化水平;孕期NO2暴露与rs1799809位点多态性交互作用可影响新生儿PROC基因启动子区甲基化水平。 3.新生儿出生特征受产妇年龄、孕期体重增长、孕前BMI、孕期SO2、孕期NO2暴露影响,而与新生儿及产妇PROC基因启动子区甲基化水平无关。rs1799809位点多态性与孕期PM10暴露交互作用可影响新生儿出生体重。